[發明專利]一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法

有效

• 申請號: 201911422043.8
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111122740B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 徐麗俠;程紅艷
• 申請（專利權）人: 辰欣藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 郝彥東

本發明屬于藥物分析技術領域，涉及一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法。其采用C18鍵合相硅膠柱，分別以磷酸鹽緩沖液和乙腈配制流動相A相和B相，進行洗脫，檢測波長為205?230nm，柱溫為25?40℃，流速為0.8?2ml/min，進樣量為5?50uL；其中，磷酸鹽緩沖液的配制方法為：取磷酸二氫銨0.1503g，加三乙胺1ml加水1000ml溶解，用磷酸調pH值為3.0；梯度洗脫程序為：0?40min，A：80?30％，40?45min，A：30?30％，45?50min，A：30?80％，50?55min，A：80?80％。與現有技術相比，本發明在檢測時奧沙利鉑與相鄰雜質均分離良好，且具有靈敏度高、專屬性強、精密度好，耐用性強等優點，可作為奧沙利鉑的有關物質檢查方法。涉及的色譜柱除具備上述良好性能外，而且還健合原料易得，加工簡單，適合大規模工業生產。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法。

背景技術

奧沙利鉑為左旋反式二氮環已烷草酸鉑，在體液中通過非酶反應取代不穩定的草酸鹽配體，轉化為具有生物活性的一水合和二水合1,2-二氨基環己烷鉑衍生物。這些衍生物可以與DNA形成鏈內和鏈間交聯，抑制DNA的復制和轉錄。奧沙利鉑屬非周期特異性抗腫瘤藥。動物實驗提示，奧沙利鉑具有抗結腸癌作用；與5-氟尿嘧啶合用，在HT29結腸癌、GR乳腺癌和L1210白血病模型中均顯示出強于單藥的抗瘤活性。1996年10月在法國率先上市，臨床用于抗腫瘤藥。

奧沙利鉑在放置的過程中，會產生降解雜質，而影響產品的質量，這些雜質即藥物質量控制中的有關物質。除對雜質總量要作限制外，對于奧沙利鉑(A)有關雜質要專項控制的主要有兩個：雙水二氨環己烷鉑(B)及二聚物(C)，結構如下所示。

對與降解產生的有關物質，在原料和制劑中需要進行質量控制的，因此，實現奧沙利鉑與其有關物質的分離與分析，對于奧沙利鉑的質量控制具有重要的現實意義。液相色譜作為化學分離和保留的一個強有力工具，在實驗室中得到了越來越廣泛的應用。但色譜柱的性能及所建立的方法，對靈敏度及分離度影響極大，這對于藥品通過相關質檢要求具有重要作用。目前，雖有奧沙利鉑有關物質的方法，但尚不夠精細。

發明內容

在測定植物成分8-異戊烯基柚皮素過程中，發現常規C18鍵合相色譜柱對8-異戊烯基柚皮素具有較好的吸附作用，同時，吸附一定量后，會改變色譜柱的分離性能，而后該色譜柱在用于測定奧沙利鉑及其有關物質，突然發現其靈敏度及分離度都為正向改變。鑒于此此，本發明提供了一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，該方法能夠提高奧沙利鉑有關物質的靈敏度及分離度，為奧沙利鉑制劑通過質檢提供保障。

本發明所述的一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，采用C18鍵合相硅膠柱，分別以磷酸鹽緩沖液和乙腈配制流動相A相和B相，進行洗脫，檢測波長為205～230nm，柱溫為25～40℃，流速為0.8～2ml/min，進樣量為5～50uL；其中，磷酸鹽緩沖液的配制方法為：取磷酸二氫銨0.1503g，加三乙胺1ml加水1000ml溶解，用磷酸調pH值為3.0；梯度洗脫程序為：0-40min，A：80-30％，40-45min，A：30-30％，45-50min，A：30-80％，50-55min，A：80-80％；所述C18鍵合相硅膠柱的制備步驟如下：

1)將顆粒分布均勻、直徑2-5μm的硅膠微球置于HCl溶液中，超聲0.5-2h后，過濾，用蒸餾水充分洗滌至近中性，干燥，得到活化硅膠；

2)將活化硅膠加入干燥甲苯中，甲苯相對于活化硅膠的用量為8mL/g，移取十八烷基三氯硅烷，控制水浴溫度為30℃，350rmp的攪拌速度下反應2h；反應結束后，再用干燥的甲苯洗滌數次，以除去剩余的十八烷基三氯硅烷及反應生成的少量HCl；