[發明專利]一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法

有效

• 申請號: 201911422043.8
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111122740B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 徐麗俠;程紅艷
• 申請（專利權）人: 辰欣藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 郝彥東

1.一種基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，其特征在于，采用C18鍵合相硅膠柱，分別以磷酸鹽緩沖液和乙腈配制流動相A相和B相，進行洗脫，檢測波長為205～230nm，柱溫為25～40℃，流速為0.8～2ml/min，進樣量為5～50uL；其中，磷酸鹽緩沖液的配制方法為：取磷酸二氫銨0.1503g，加三乙胺1ml加水1000ml溶解，用磷酸調pH值為3.0；梯度洗脫程序為：0-40min，A：80-30％，40-45min，A：30-30％，45-50min，A：30-80％，50-55min，A：80-80％；所述C18鍵合相色譜柱的制備步驟如下：

1)將顆粒分布均勻、直徑2-5μm的硅膠微球置于HCl溶液中，超聲0.5-2h后，過濾，用蒸餾水充分洗滌至近中性，干燥，得到活化硅膠；

2)將活化硅膠加入干燥甲苯中，甲苯相對于活化硅膠的用量為8mL/g，移取十八烷基三氯硅烷，控制水浴溫度為30℃，350rmp的攪拌速度下反應2h；反應結束后，再用干燥的甲苯洗滌數次，以除去剩余的十八烷基三氯硅烷及反應生成的少量HCl；

3)加入摩爾量為十八烷基三氯硅烷兩倍以上的6-異戊烯基柚皮素或8-異戊烯基柚皮素，使C18鍵合硅膠中的氯轉化為醚氧鍵，先用甲醇沖洗，最后用干燥二氯甲烷洗滌以除去反應生成的少量HCl，將洗后的產物置于真空干燥箱中，80℃真空干燥8h，得到復合填料；

4)將柱子以丙酮清洗干凈，并以加熱的N₂氣熱風吹干，將清潔后的柱管的一端裝配上帶濾板的柱頭，另一端則連接至勻漿罐上；

5)將復合填料浮選得到顆粒均勻的色譜填料；將色譜填料以四氯化碳為勻漿液混合均勻后，勻漿法裝入色譜柱中，替換四氯化碳，即得。

2.根據權利要求1所述的基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，其特征在于，所述HCl溶液的質量百分濃度為12-18％，相對于硅膠微球用量為5-7mL/g。

3.根據權利要求1所述的基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，其特征在于，所述十八烷基三氯硅烷相對于活化硅膠用量為6-8mL/g。

4.根據權利要求1所述的基于C18鍵合相色譜柱分離測定奧沙利鉑有關物質的方法，其特征在于，所述檢測波長為215nm，流速為1.0ml/min，柱溫為40℃，進樣量為20uL。

5.一種C18鍵合相色譜柱，其特征在于，具體制備步驟為：1)將顆粒分布均勻、直徑2-5μm的硅膠微球置于HCl溶液中，超聲0.5-2h后，過濾，用蒸餾水充分洗滌至近中性，干燥，得到活化硅膠；2)將活化硅膠加入干燥甲苯中，甲苯相對于活化硅膠的用量為8mL/g，移取十八烷基三氯硅烷，控制水浴溫度為30℃，350rmp的攪拌速度下反應2h；反應結束后，再用干燥的甲苯洗滌數次，以除去剩余的十八烷基三氯硅烷及反應生成的少量HCl；3)加入摩爾量為十八烷基三氯硅烷兩倍以上的6-異戊烯基柚皮素或8-異戊烯基柚皮素，使C18鍵合硅膠中的氯轉化為醚氧鍵，先用甲醇沖洗，最后用干燥二氯甲烷洗滌以除去反應生成的少量HCl，將洗后的產物置于真空干燥箱中，80℃真空干燥8h，得到復合填料；4)將柱子以丙酮清洗干凈，并以加熱的N₂氣熱風吹干，將清潔后的柱管的一端裝配上帶濾板的柱頭，另一端則連接至勻漿罐上；5)將復合填料浮選得到顆粒均勻的色譜填料；將色譜填料以四氯化碳為勻漿液混合均勻后，勻漿法裝入色譜柱中，替換四氯化碳，即得。