[發(fā)明專利]一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法

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• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110951726A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊希寅;王春香
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京常青藤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32286
• 代理人: 仲暉

本發(fā)明提供一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，包括如下步驟：采集感染有幽門螺桿菌的患者的新鮮糞便樣本作為原材料放入第一離心管中；羥基磁珠提取糞便中的幽門螺桿菌DNA；羧基磁珠提取處理液中的幽門螺桿菌DNA。本發(fā)明提取效率高，純度好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法。

背景技術(shù)

幽門螺桿菌(Helicobacter pylroi，簡稱H.pylori或HP)是一種螺旋形、微厭氧、的細(xì)菌，可寄生在人的胃部，并可隨糞便少量的排出體外。全世界有超過半數(shù)的人感染HP，目前對幽門螺桿菌的診斷主要采用C13吹氣實驗，但其存在著約10％的誤診率，因此不能作為檢測幽門螺桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)，并且C13具有一定的放射性，可能對人體有一定的傷害。糞便中檢幽門螺桿菌可作為一個待發(fā)展的檢測方向，但糞便中的雜質(zhì)非常多，使用常規(guī)方法提取到的DNA中含有很多的抑制物，對后續(xù)的PCR實驗產(chǎn)生抑制，因此PCR實驗很難檢測到含量較低的幽門螺桿菌DNA。

因此急需提供一種提取效率高，純度好的糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法的不足，提供一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法。

本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，包括如下步驟：

S1.采集感染有幽門螺桿菌的患者的新鮮糞便樣本作為原材料放入第一離心管中；

S2.羥基磁珠提取糞便中的幽門螺桿菌DNA：糞便樣本中加入生理鹽水和異硫氰酸胍裂解液，糞便樣品渦旋振蕩至均質(zhì)化后置于恒溫混勻儀中，混勻后在12000rpm的條件下離心5min使糞便顆粒沉淀，取上清液至第二離心管中，加入蛋白酶K和5％SDS溶液，渦旋振蕩后置于恒溫混勻儀中，混勻后加入異丙醇和表面經(jīng)硅羥基包被的磁珠，渦旋振蕩后置于恒溫混勻儀中，混勻后將第二離心管置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后向第二離心管中加入洗滌液a，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后向第二離心管中加入洗滌液b，吹勻后置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后靜置第二離心管至液體全部揮發(fā)，向第二離心管中加入ddH2O，吹勻后置于恒溫混勻儀中，瞬離第二離心管后置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，吸取第二離心管中的處理液至第三離心管中；

S3.羧基磁珠提取處理液中的幽門螺桿菌DNA：向第三離心管中加入羧基磁珠，渦旋振蕩后于室溫下靜置5min，將第三離心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，避免接觸磁珠的情況下棄去第三離心管中的溶液，向第三離心管中加入80％乙醇，待懸起的磁珠完全吸附后棄去第三離心管中的溶液，靜置10min至乙醇完全揮發(fā)后加入ddH20，渦旋振蕩使磁珠完全重懸于ddH20中后，室溫下靜置5min，將第三離心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，將洗脫液轉(zhuǎn)移至第四離心管中，即得到純凈的DNA。

優(yōu)選的，步驟S2中異硫氰酸胍裂解液的濃度為5mol/L。

優(yōu)選的，步驟S2中洗滌液a包括3M鹽酸胍、10mMTris和50％乙醇，洗滌液a的pH至為8.0。

優(yōu)選的，步驟S2中洗滌液b包括10mMTris和80％乙醇。

本發(fā)明的有益效果是：由于羥基磁珠和羧基磁珠均可吸附DNA，對糞便中的雜志類物質(zhì)(比如多糖和色素)的吸附情況不同，組合使用羥基磁珠和羧基磁珠對糞便提取DNA可有效去除糞便中大量不易去除的雜質(zhì)，可提取到高純度的DNA。

附圖說明

附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：