[發明專利]一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法

在審

• 申請號: 201911418991.4
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110951726A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 楊希寅;王春香
• 申請（專利權）人: 江蘇康為世紀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 仲暉

1.一種糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.采集感染有幽門螺桿菌的患者的新鮮糞便樣本作為原材料放入第一離心管中；

S2.羥基磁珠提取糞便中的幽門螺桿菌DNA：糞便樣本中加入生理鹽水和異硫氰酸胍裂解液，糞便樣品渦旋振蕩至均質化后置于恒溫混勻儀中，混勻后在12000rpm的條件下離心5min使糞便顆粒沉淀，取上清液至第二離心管中，加入蛋白酶K和5％SDS溶液，渦旋振蕩后置于恒溫混勻儀中，混勻后加入異丙醇和表面經硅羥基包被的磁珠，渦旋振蕩后置于恒溫混勻儀中，混勻后將第二離心管置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后向第二離心管中加入洗滌液a，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后向第二離心管中加入洗滌液b，吹勻后置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，棄去溶液后靜置第二離心管至液體全部揮發，向第二離心管中加入ddH2O，吹勻后置于恒溫混勻儀中，瞬離第二離心管后置于磁力架上，靜置至磁珠全部吸附，吸取第二離心管中的處理液至第三離心管中；

S3.羧基磁珠提取處理液中的幽門螺桿菌DNA：向第三離心管中加入羧基磁珠，渦旋振蕩后于室溫下靜置5min，將第三離心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，避免接觸磁珠的情況下棄去第三離心管中的溶液，向第三離心管中加入80％乙醇，待懸起的磁珠完全吸附后棄去第三離心管中的溶液，靜置10min至乙醇完全揮發后加入ddH20，渦旋振蕩使磁珠完全重懸于ddH20中后，室溫下靜置5min，將第三離心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，將洗脫液轉移至第四離心管中，即得到純凈的DNA。

2.根據權利要求1所述的糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，其特征在于，步驟S2中異硫氰酸胍裂解液的濃度為5mol/L。

3.根據權利要求2所述的糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，其特征在于，步驟S2中洗滌液a包括3M鹽酸胍、10mM Tris和50％乙醇，洗滌液a的pH至為8.0。

4.根據權利要求3所述的糞便中提取幽門螺桿菌DNA的方法，其特征在于，步驟S2中洗滌液b包括10mM Tris和80％乙醇。