[發明專利]一種從動物胰臟中提取三種酶的工藝方法

有效

• 申請號: 201911418803.8
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111117989B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 萬偲;徐富勇;陳潔玉;耿衛鋒;李國龍
• 申請（專利權）人: 江西浩然生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C12N9/76
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 龔家驊

本發明公開了一種從動物胰臟中提取三種酶的工藝方法，以動物胰臟為原料，經組織絞碎，激活，浸泡，過濾，超濾，陰離子交換層析，疏水層析獲得高純度胰激肽原酶；陰離子交換層析過柱液經陽離子交換層析獲得彈性酶；活化Sepharose、氨基己酸接臂、鄰氨基苯甲醚偶聯得O?Anisidin?ACA?Sepharose親和吸附劑對陽離子交換層析過柱液進行吸附獲得高純度糜蛋白酶。該方法實現胰激肽原酶，糜蛋白酶，彈性酶三酶聯產且操作簡便、產品純度高、減少了資源浪費。O?Anisidin?ACA?Sepharose介質的合成及使用降低了生產成本，提高了產品質量。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，尤其涉及一種從動物胰臟提取三種酶的工藝方法。

背景技術

胰激肽原酶(Pancreatic Kallidinogenase)，又稱為胰激肽釋放酶、血管舒緩素，是一類內切型蛋白水解酶，存在于哺乳動物體內的多種組織，尤以胰臟中含量最為豐富。胰激肽原酶是一種由18種氨基酸、4種糖組成的糖蛋白，分子量約為26800，等電點為4.05。

糜蛋白酶又稱胰凝乳蛋白酶，系從動物胰臟中提取的一種蛋白酶，屬于絲氨酸膚鏈內切酶，等電點為8.1。

彈性酶(Elastase)，是一種以分解不溶性彈性蛋白為特征的廣譜蛋白水解酶，等電點為9.5，主要存在于動物胰臟、皮膚、主動脈、血小板和白血球中。

胰激肽原酶、糜蛋白酶、彈性酶在臨床上有廣泛運用且價格昂貴。三種酶均可從動物胰臟中獲得，以往工藝提取一種酶時其他酶被當作雜質處理了且其他酶的結構已糟到很大的破壞，難于形成多酶聯產。如今隨著生物純化技術的發展，多酶聯產工藝得于實現。三酶聯產極大地提高動物胰臟的利用率，有著巨大的經濟效益和社會效益。

我國專利(CN103275948)公開了“從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝”。該專利采用組織絞碎、酸浸提取、過濾分離、超濾濃縮、一段鹽析、二段鹽析、溶解激活、凈化、過濾、脫鹽濃縮、一段層析和二段層析等步驟，獲得脫氧核糖核酸酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶和激肽原酶四種酶產品。其中關鍵點為采用鹽析得脫氧核糖核酸酶；采用二乙酰氨基瓊脂糖凝膠層析得糜蛋白酶；采用雙丙酰胺葡聚糖凝膠吸附得激肽原酶，通過液為胰蛋白酶。因糜蛋白酶等電點為8.1，胰激肽原酶等電點為4.05，二乙酰氨基瓊脂糖凝膠層析為陰離子交換柱，純化后的糜蛋白酶純度不高；胰蛋白酶等電點為10.1，彈性酶的等電點為9.5，雙丙酰胺葡聚糖凝膠液也為陰離子柱故該工藝存在著獲得的產品純度不高，且操作復雜等缺點。

由此可見，提供一種操作方便、產品純度高的多酶聯產的方法成為本領域技術人員亟待解決的技術問題。

發明內容

鑒于現有技術多酶聯產的操作復雜，產品純度低等缺點。本發明提供了一種從動物胰臟中提取三種酶的工藝方法，具體步驟如下：

(1)將動物胰臟進行絞碎處理，得到組織碎漿；

(2)在所述組織碎漿中加入氯化鈣溶液，將pH調節至第一pH區間，在35℃-45℃范圍進行保溫；

(3)所述組織碎漿保溫完畢后加入硅藻土，進行過濾處理，將得到的濾液1進行超濾濃縮處理，得到濃縮液；

(4)將所述濃縮液上樣至平衡處理后的陰離子交換層析柱，進行洗脫處理，收集過柱液1與洗脫流出液1；

(5)將所述洗脫流出液1上樣至平衡處理后的疏水層析柱，進行洗脫處理，收集洗脫流出液2，所述洗脫流出液2依次進行超濾除鹽處理，膜過濾處理，得到濾液2，將所述濾液2凍干，得到高純度胰激肽原酶；

(6)將所述過柱液1上樣至平衡處理后的陽離子交換層析柱，進行洗脫處理，收集過柱液2，和洗脫流出液3，將所述洗脫流出液3依次進行超濾除鹽處理，膜過濾處理，得到濾液3，將所述濾液3凍干，得的彈性酶；