[發(fā)明專利]一種靈芝的組培方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911418057.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111149617B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 覃華興;劉長(zhǎng)斯;韋孟寶;梁李;韋珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西仙草堂制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A01G18/00
• 分類號(hào): A01G18/00;A01G18/20;A01G18/30;A01G18/40;A01G18/69;A01N37/38;A01N43/16;A01N37/06;A01N63/22;A01N47/46;A01N43/90;A01N49/00;A01P3/00;A01P1/00
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 李生梅

本發(fā)明提供一種靈芝的組培方法,具體涉及食用菌組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明突破性地以靈芝子實(shí)體組織中的多酚氧化酶為關(guān)注對(duì)象，在切取外植體前先用生物消毒液降低子實(shí)體中多酚氧化酶活性，防止其產(chǎn)生褐變，再于獲取外植體后采用保鮮液冷藏和活化激活外植體中的纖維素酶和多酚酶，促進(jìn)外植體接種后迅速生長(zhǎng)出菌絲，并在培養(yǎng)期間采用特定波長(zhǎng)的紅光和綠光交替、間歇照射，之后用微波照射試煉，刺激菌絲體的生長(zhǎng)和其中有效成分的富集。本發(fā)明的外植體成活率為72％以上，獲得的菌絲體生長(zhǎng)速度為8mm/d，總氨基酸含量為16％以上、多糖含量4％以上。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及食用菌組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靈芝的組培方法。

【背景技術(shù)】

靈芝在中國(guó)向來(lái)被視為草木菁英，有“瑞草”、“仙草”等美譽(yù)，在日本被稱為萬(wàn)年茸，是一種珍貴的藥(食)用菌。《神農(nóng)本草經(jīng)》指出：赤芝(即靈芝)“苦，平，無(wú)毒”，主治“胸中結(jié)、益心氣，補(bǔ)中、增智慧、不忘”，“久食輕身不老，延年神仙”。《本草綱目》記載靈芝有“滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽、利關(guān)節(jié)、治耳聾”等神奇功效，將其列為藥中上品。

在自然界中，靈芝通過(guò)子實(shí)體產(chǎn)生孢子進(jìn)行有性繁殖。當(dāng)人們將靈芝進(jìn)行引種馴化后，發(fā)現(xiàn)采用孢子進(jìn)行育種的萌發(fā)率極低，由此人們發(fā)展出了用孢子或子實(shí)體組織細(xì)胞作為外植體經(jīng)培養(yǎng)萌發(fā)形成的純菌絲體的育種方法。目前，在靈芝的實(shí)體組織細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，極少關(guān)注其中酶的活性情況，只是按常規(guī)的組培方法進(jìn)行組織分離和培養(yǎng)操作，如中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)為CN107750814A、名為一種野生靈芝菌種的培育方法的專利文獻(xiàn)，公開(kāi)了將靈芝菌肉組織依次從原種培育到栽培種培育的過(guò)程，該方法雖然能夠獲得菌絲作為菌種，但外植體成活率低、各階段菌絲的生長(zhǎng)速度也較低，且氨基酸和多糖成分含量低，直接造成子實(shí)體發(fā)育緩慢和有效成分含量低。

因此，為使人工繁育靈芝獲得更大的成功、促進(jìn)靈芝產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展，有必要開(kāi)發(fā)一種菌絲生長(zhǎng)迅速、有效成分含量高的靈芝組培方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對(duì)靈芝現(xiàn)有組培方法中外植體成活率低、菌絲的生長(zhǎng)速度較低，且氨基酸和多糖成分含量低的問(wèn)題，提供一種靈芝的組培方法。本發(fā)明的外植體成活率為72％以上，獲得的菌絲體生長(zhǎng)速度為8mm/d，總氨基酸含量為16％以上、多糖含量4％以上。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種靈芝的組培方法，包括以下步驟：

a.取靈芝子實(shí)體，浸泡于超凈臺(tái)上的生物消毒液中進(jìn)行消毒，浸泡時(shí)間為60-120秒，然后取出；

b.用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)消毒后的子實(shí)體，在菌柄和菌蓋之間顯露出的菌肉中切取米粒大小作為外植體，然后取外植體噴灑保鮮液，再密封以保持無(wú)菌狀態(tài)，接著置于1-5℃下冷藏2-6小時(shí)，取出后再置于15-25℃下活化4-8小時(shí)，重復(fù)進(jìn)行冷藏和活化2-4次，得激活外植體；

c.將激活外植體接種于母種培養(yǎng)基上，在20-30℃培養(yǎng)10-20天，使培養(yǎng)基長(zhǎng)滿菌絲體，得母種；培養(yǎng)期間每天采用波長(zhǎng)為670-720nm的紅光和波長(zhǎng)為512-520nm的綠光交替照射，設(shè)置光照強(qiáng)度為5-25lx，光照時(shí)間為140-200分鐘，其余時(shí)間為黑暗無(wú)光照條件，紅光與綠光的交替時(shí)間為20-40分鐘；

d.將母種置于微波照射下試煉12-24小時(shí)，設(shè)置照射波長(zhǎng)為4-10cm、照射功率密度為15-25mW/cm²、微波源與母種的距離為1-2m，得試煉種；

e.取試煉種接種至MS培養(yǎng)基上，在20-30℃下進(jìn)行培養(yǎng)，使MS培養(yǎng)基上長(zhǎng)滿菌絲體，得栽培種，將栽培種接種于菌袋或段木上，按常規(guī)方法進(jìn)行栽培出菇，即可采收。