[發(fā)明專利]一種靈芝的組培方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911418057.2 | 申請日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN111149617B | 公開（公告）日： | 2021-09-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 覃華興;劉長斯;韋孟寶;梁李;韋珍 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西仙草堂制藥有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | A01G18/00 | 分類號： | A01G18/00;A01G18/20;A01G18/30;A01G18/40;A01G18/69;A01N37/38;A01N43/16;A01N37/06;A01N63/22;A01N47/46;A01N43/90;A01N49/00;A01P3/00;A01P1/00 |
| 代理公司： | 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403 | 代理人： | 李生梅 |
| 地址： | 545400 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 靈芝 方法 | ||
1.一種靈芝的組培方法，其特征在于，包括以下步驟：
a.取靈芝子實(shí)體，浸泡于超凈臺上的生物消毒液中進(jìn)行消毒，浸泡時間為60-120秒，然后取出；所述生物消毒液包括以下原料：谷維素、殼聚糖、花生四烯酸、解淀粉芽孢桿菌、異硫氰酸酯、青蒿素、春雷霉素、蝦青素和水；
b.用無菌手術(shù)刀切開消毒后的子實(shí)體，在菌柄和菌蓋之間顯露出的菌肉中切取米粒大小作為外植體，然后取外植體噴灑保鮮液，再密封以保持無菌狀態(tài)，接著置于1-5℃下冷藏2-6小時，取出后再置于15-25℃下活化4-8小時，重復(fù)進(jìn)行冷藏和活化2-4次，得激活外植體；所述保鮮液包括以下原料：玉米朊、葉綠素、蝦青素、碧蘿芷、谷維素、辣木籽提取物、玉米赤霉烯酮、5-羥基色胺、甘露低聚糖和甘油；
c.將激活外植體接種于母種培養(yǎng)基上，在20-30℃培養(yǎng)10-20天，使培養(yǎng)基長滿菌絲體，得母種；培養(yǎng)期間每天采用波長為670-720nm的紅光和波長為512-520nm的綠光交替照射，設(shè)置光照強(qiáng)度為5-25lx，光照時間為140-200分鐘，其余時間為黑暗無光照條件，紅光與綠光的交替時間為20-40分鐘；所述母種培養(yǎng)基的制備方法為：取MS培養(yǎng)基加熱使溶解，然后在培養(yǎng)基中加入青蒿精油、玉米素、萘乙酸、納豆，攪拌均勻后冷卻，經(jīng)過培養(yǎng)后，接著加熱使再次溶解，繼續(xù)在培養(yǎng)基中加入亞硒硫酸鈉、褪黑素、玉米赤霉烯酮，攪拌均勻后進(jìn)行滅菌、冷卻，得母種培養(yǎng)基；
d.將母種置于微波照射下試煉12-24小時，設(shè)置照射波長為4-10cm、照射功率密度為15-25mW/cm2、微波源與母種的距離為1-2m，得試煉種；
e.取試煉種接種至MS培養(yǎng)基上，在20-30℃下進(jìn)行培養(yǎng)，使MS培養(yǎng)基上長滿菌絲體，得栽培種，將栽培種接種于菌袋或段木上，按常規(guī)方法進(jìn)行栽培出菇，即可采收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，步驟a中所述生物消毒液包括以下重量份比的原料：谷維素5-15份、殼聚糖12-24份、花生四烯酸10-20份、解淀粉芽孢桿菌0.01-0.05份、異硫氰酸酯0.03-0.07份、青蒿素0.01-0.04份、春雷霉素0.02-0.07份、蝦青素0.08-0.14份和水100-200份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，所述生物消毒液的制備方法為：取谷維素、殼聚糖、花生四烯酸和解淀粉芽孢桿菌，加水?dāng)嚢杈鶆?，?0-30℃下培養(yǎng)80-100小時，然后取出，加入異硫氰酸酯、青蒿素、春雷霉素、蝦青素，攪拌均勻，接著采用孔徑為0.22μm的濾膜過濾除菌，得生物消毒液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，步驟b中所述保鮮液包括以下重量份比的原料：玉米朊20-30份、葉綠素0.1-0.7份、蝦青素0.5-1.7份、碧蘿芷3-9份、谷維素2-8份、辣木籽提取物15-25份、玉米赤霉烯酮0.2-0.6份、5-羥基色胺0.04-0.1份、甘露低聚糖1-3份和甘油110-180份。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，所述辣木籽提取物的制備方法為：取辣木籽粉碎后，加水濕潤，使水分含量為21%-31%，然后置于閃爆器中進(jìn)行高壓蒸汽閃爆處理，設(shè)置閃爆器溫度為70-90℃、壓力為1-3MPa、保壓時間為140-160秒、卸壓時間為0.03-0.08秒、閃爆次數(shù)為2-4次，得閃爆粉，接著取閃爆粉按料液比g/ml為1:7-15加入水微波萃取65-95分鐘，設(shè)置微波萃取的功率為700-1100w，隨后過濾，收集濾液濃縮干燥，得辣木籽提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，所述保鮮液的制備方法為：取玉米朊、葉綠素、蝦青素、碧蘿芷混合均勻，然后加入20%-30%重量的甘油，置于高壓均質(zhì)機(jī)中進(jìn)行均質(zhì)，設(shè)置高壓均質(zhì)機(jī)溫度為5-15℃、壓力為30-50Mpa、循環(huán)次數(shù)為2-4次，得均質(zhì)包合物，備用；取剩余甘油加熱至55-75℃，加入谷維素、辣木籽提取物、玉米赤霉烯酮、5-羥基色胺和甘露低聚糖，攪拌均勻，然后冷卻至室溫，加入所述均質(zhì)包合物，攪拌均勻，得保鮮液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝的組培方法，其特征在于，步驟c中所述母種培養(yǎng)基的制備方法為：取MS培養(yǎng)基加熱使溶解，然后在每升培養(yǎng)基中加入青蒿精油10-20mg、15-25mg玉米素、4-10mg萘乙酸、5-15g納豆，攪拌均勻后冷卻，在20-30℃下培養(yǎng)72-94小時，接著加熱使再次溶解，繼續(xù)在每升培養(yǎng)基中加入亞硒硫酸鈉0.1-0.5g、褪黑素4-10mg、玉米赤霉烯酮3-9mg，攪拌均勻后進(jìn)行滅菌、冷卻，得母種培養(yǎng)基。
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