[發明專利]一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法

有效

• 申請號: 201911417917.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111024883B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 王少雄;呂品;陳鵬
• 申請（專利權）人: 上海博威生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/96
• 分類號: G01N30/96;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/88;C07K16/42;C07K1/18;B01D15/08
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法。所述分離方法包括如下步驟：用羧肽酶對奧馬珠單抗樣品進行酶切；用離子交換高效液相色譜對奧馬珠單抗樣品，或者羧肽酶酶切后的奧馬珠單抗樣品進行分離。本發明提供的分離方法檢測時間適宜，40min即可完成檢測，酸峰、主峰和堿峰的出峰時間適宜，各峰的分離度高，該分離方法具有較高的專屬性、準確度及精密度，穩定可行。

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，具體涉及一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法。

背景技術

奧馬珠單抗(Xolair)是選擇性結合人類免疫球蛋白E(IgE)的一種重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，具有約149kD的分子量。奧馬珠單抗目前適用于治療皮膚測試呈陽性或在體外對長期氣源性致敏原具有反應性且具有吸入性皮質類固醇不充分控制的癥狀的患者中的中度至重度持久性哮喘。是全球首個批準治療中至重度哮喘的靶向治療藥物，該產品于2003年首次在全球上市，已在96個國家獲得批準，包括美國、歐盟、日本等。

用奧馬珠單抗的問題在于：1)其在藥學相關劑量下靶向游離IgE，但不靶向(或不能有效靶向)IgE/FcεRI復合物的致病性種類；2)可能由于IgE/FcεRI復合物的的致病性種類不被靶向；3)其不應當用于具有高IgE水平的患者(例如，因為IgE/FcεRI復合物的致病性種類不被靶向，且鑒于患者中的高游離IgE水平而不會隨時間耗散)；4)“當服用奧馬珠單抗時可以發生I型局部或全身反應，包括過敏反應和過敏性休克”；5)其對IgE的親和力并不是特別好。

奧馬珠單抗作為復雜的大分子物質，在細胞培養、純化、運輸、存儲過程中，可能在組成氨基酸、二硫鍵、糖基化等層面發生不同程度的變化，進而引起電荷變化。電荷異質體的修飾微店、種類可能影響奧馬珠單抗的功能和穩定性，因此對奧馬珠單抗的電荷異質體的分析具有重要意義。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法。該分離方法穩定可行，具有較高的專屬性和準確度。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法，所述分離方法包括如下步驟：

(1)用羧肽酶對奧馬珠單抗樣品進行酶切；

(2)用離子交換高效液相色譜對奧馬珠單抗樣品，或者羧肽酶酶切后的奧馬珠單抗樣品進行分離。

本發明利用離子交換高效液相色譜(CEX-HPLC)柱對不同離子的分離能力，即帶電荷的單抗與固定相之間發生離子交換能力的差異，從而分離單抗的電荷異質體。通過對得到的色譜圖中各峰進行積分分析，可以得出電荷異質體的含量；通過分析羧肽酶(CPB酶)酶切前后奧馬珠單抗樣品的色譜圖的變化，可以得知奧馬珠單抗樣品中電荷異質體的種類。

作為本發明的優選技術方案，步驟(1)中所述羧肽酶與所述奧馬珠單抗樣品的質量比為(1-5):100，例如可以是1:100、1.5:100、2:100、2.5:100、3:100、3.5:100、4:100、4.5:100或5:100等；進一步優選為1:100。

作為本發明的優選技術方案，步驟(1)中所述酶切的反應溫度為35-40℃，例如可以是35℃、35.5℃、36℃、36.5℃、37℃、37.5℃、38℃、38.5℃、39℃、39.5℃或40℃等；進一步優選為37℃。

優選地，步驟(1)中所述酶解的反應時間為3-6.5h，例如可以是3h、3.2h、3.5h、3.8h、4h、4.2h、4.5h、4.8h、5h、5.2h、5.5h、5.8h、6h、6.2h或6.5h等；進一步優選為3h。