[發明專利]一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法

有效

• 申請號: 201911417917.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111024883B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 王少雄;呂品;陳鵬
• 申請（專利權）人: 上海博威生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/96
• 分類號: G01N30/96;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/88;C07K16/42;C07K1/18;B01D15/08
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種奧馬珠單抗的電荷異質體的分離方法，其特征在于，所述分離方法包括如下步驟：

（1）用羧肽酶對奧馬珠單抗樣品進行酶切；

（2）用離子交換高效液相色譜對奧馬珠單抗樣品，或者羧肽酶酶切后的奧馬珠單抗樣品進行分離；

所述離子交換高效液相色譜采用流動相進行梯度洗脫，所述梯度洗脫使用的流動相的pH隨洗脫時間先增大后減小，所述梯度洗脫使用的流動相由如下體積百分比的流動相A和流動相B組成：0-5 min：80%流動相A和20%流動相B；30-32 min：100%流動相B；36-40 min：80%流動相A和20%流動相B；所述流動相A為11.6 mM哌嗪、15 mM咪唑和2.4 mM Tris，pH為6.0；所述流動相B為11.6 mM哌嗪、15 mM咪唑和2.4 mM Tris，pH為9.5；所述離子交換高效液相色譜采用的色譜柱的固定相為帶羧基官能團的弱陽離子鍵合相；所述離子交換高效液相色譜的檢測波長為275-285 nm。

2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述羧肽酶與所述奧馬珠單抗樣品的質量比為(1-5):100。

3.根據權利要求2所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述羧肽酶與所述奧馬珠單抗樣品的質量比為1:100。

4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述酶切的反應溫度為35-40℃。

5.根據權利要求4所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述酶切的反應溫度為37℃。

6.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述酶切的反應時間為3-6.5 h。

7.根據權利要求6所述的分離方法，其特征在于，步驟（1）中所述酶切的反應時間為3h。

8.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜的進樣濃度為0.5-1.5 mg/mL。

9.根據權利要求8所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜的進樣濃度為1 mg/mL。

10.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜采用的色譜柱的溫度為30-40℃。

11.根據權利要求10所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜采用的色譜柱的溫度為32℃。

12.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜的檢測波長為280 nm。

13.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述流動相的流速為0.8-1.2 mL/min。

14.根據權利要求13所述的分離方法，其特征在于，所述流動相的流速為1 mL/min。

15.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜的進樣體積為15-25μL。

16.根據權利要求15所述的分離方法，其特征在于，所述離子交換高效液相色譜的進樣體積為20μL。