[發明專利]一種檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201911416705.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111175510A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 史西志;張澤明;劉晨曦;張蓉蓉;孫愛麗;陳炯
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/53
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

1.一種檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條，包括樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC底板，所述的PVC底板上按順序依次粘附有樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述的硝酸纖維素膜上設置有檢測線和質控線，其特征在于：所述的檢測線和所述的質控線上包被有敵稗分子印跡聚合物-量子點復合物。

2.根據權利要求1所述的一種檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條，其特征在于：所述的檢測線與所述的質控線之間的間隔距離為5 mm，所述的檢測線和所述的質控線之間的硝酸纖維素膜的中間隔斷距離為1 mm。

3.一種權利要求1所述的檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）敵稗配制

采用由環己烷和丙酮按體積比9：1的比例混合而成的溶液為溶劑配制敵稗溶液；

（2）敵稗分子印跡聚合物-量子點復合物的制備

將1.8 mL的Triton x-100和7.5 mL的致孔劑環己烷加入圓底燒瓶，以400 r/min的速度常溫攪拌15 min，然后向圓底燒瓶中加入400 μL濃度為1 mg/mL 的溶于氯仿的CdSe/ZnS量子點溶液，再加入50 μL的交聯劑TEOS和100 μL的氨水，黑暗常溫攪拌2小時；將45.6 μL的APTES和110 μL的濃度為25 mg/mL的敵稗溶液加入到小棕瓶中，黑暗中攪拌2小時后；目的是待測物質敵稗與功能單體APTES的鍵合；將小棕瓶中的混合物倒入圓底燒瓶，繼續黑暗環境下攪拌12小時；然后倒入盛有10 mL丙酮的離心管中，等待沉淀完成后，以9000 r/min離心10分鐘后，去除上清液；離心管中加入6 mL 超純水，震蕩20分鐘后以9000 r/min離心20分鐘后，去除上清液；離心管中加入由 乙醇和乙腈按體積比8：2的比例混合而成的溶液，超聲均勻后震蕩40分鐘后，以9000 r/min轉速離心15分鐘，去除上清液；重復用由 乙醇和乙腈按體積比8：2的比例混合而成的溶液洗滌除去模板分子敵稗直到用熒光分光光度計測量聚合物的熒光值不再變化，即得到敵稗分子印跡聚合物-量子點復合物，將其加入到含有1 mL乙醇的琥珀色玻璃瓶內，放置在4℃冰箱避光保存；

（3）硝酸纖維素膜上檢測線T線和質控線C線的制備

將洗脫去模板分子的敵稗分子印跡聚合物-量子點復合物均勻吸附在硝酸纖維素膜上，形成熒光強度一致的檢測線T線和質控線C線，常溫下干燥避光保存；

（4）仿生免疫熒光試紙條的制備

在PVC底板上按順序依次粘附樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊，得到檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條。

4.一種權利要求1-3中任一項所述的檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：將檢測除草劑敵稗的仿生免疫熒光試紙條水平放置，用滴管向試紙孔緩慢逐滴加入含有待測樣品的檢測體系，在紫外燈下，當存在高于0.005 mg/L的敵稗分子時，可以肉眼捕捉檢測線處明顯的熒光猝滅，即可以判斷檢測體系中是否存在敵稗，檢測體系配置方法為：配制4 mmol/L的PBS緩沖液，加入氯化鈉使體系中氯化鈉濃度為0.045 g/L，調整混合液pH 為9，將待測樣品溶于檢測體系中即可。其中優化該檢測體系的目的是提高熒光試紙條的靈敏度，具體實驗操作目的是該體系可以用于配制不同濃度敵稗分子的溶劑。