[發(fā)明專利]一種細(xì)胞分離培養(yǎng)液和T細(xì)胞分離培養(yǎng)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911415731.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN111088227A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬玉國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州航華生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張東梅

1.一種細(xì)胞分離培養(yǎng)液，其特征在于，包括：中性粒細(xì)胞分離液、紅細(xì)胞裂解液、培養(yǎng)液A、培養(yǎng)液B和培養(yǎng)液C；

所述培養(yǎng)液A為：IFN-γ和基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

所述培養(yǎng)液B為：IL-2、IL-1α、CD3單克隆抗體和基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

所述培養(yǎng)液C為：IL-2和基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分離培養(yǎng)液，其特征在于，所述培養(yǎng)液A中IFN-γ的濃度為2500～5000IU/ml；

所述培養(yǎng)液B中的IL-2、IL-1α、CD3單克隆抗體的濃度分別為500～1000IU/ml、2.5～5ng/ml、250～500ng/ml；

所述培養(yǎng)液C中的IL-2濃度為500～1000IU/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分離培養(yǎng)液，其特征在于，還包括：自體血漿。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分離培養(yǎng)液，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為淋巴細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。

5.一種T細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)所述的細(xì)胞分離培養(yǎng)液。

6.一種T細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：向外周血或全血中分離單個(gè)核細(xì)胞；

步驟2：向所述單個(gè)核細(xì)胞中加入紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，得到純化的單個(gè)核細(xì)胞；

步驟3：第0天，將所述純化的單個(gè)核細(xì)胞接種于培養(yǎng)液A中進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟4：培養(yǎng)至第1天，加入培養(yǎng)液B進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟5：培養(yǎng)至第4、8、11天，分別加入培養(yǎng)液C進(jìn)行培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)至第14天，得到T細(xì)胞；

所述培養(yǎng)液A為：IFN-γ和基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

所述培養(yǎng)液B為：IL-2、IL-1α、CD3單克隆抗體和基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

所述培養(yǎng)液C為：IL-2和基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，所述單個(gè)核細(xì)胞與所述紅細(xì)胞裂解液的的體積比為(1：5)～(1：8)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟1具體為：對(duì)所述外周血或全血進(jìn)行第一離心，得到血細(xì)胞懸液，然后加入中性粒細(xì)胞分離液進(jìn)行第二離心，分層后，吸取單個(gè)核細(xì)胞層，得到單個(gè)核細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，所述中性粒細(xì)胞分離液與所述血細(xì)胞懸液的體積比為2：1。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，加入所述培養(yǎng)液B和所述培養(yǎng)C時(shí)均需再加入自體血漿。