[發明專利]一種石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結合液、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201911415475.6
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111057704B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 朱方何;陳嘉昌;胡朝暉;任勝強;王慶;柳俊;劉鵬
• 申請（專利權）人: 廣州市金圻睿生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香

本發明提供了一種石蠟切片樣本DNA提取脫蠟裂解結合液、試劑盒及方法，所述脫蠟裂解結合液包含以下濃度的組分：液態脫蠟試劑25～45v/v％、無水乙醇5～10v/v％、Tris?HCl 10～500mM、鹽酸胍1～7M、尿素2～5M、NaCl 0.1～1M、SDS 0.1～5w/v％、曲拉通X?100 0.1～1v/v％、亞精胺0.1～1w/v％，余量為水。上述脫蠟裂解結合液可將樣本脫蠟、組織裂解和DNA結合在一步中完成，簡化了操作步驟，有效節省了操作時間和人力成本，適用范圍廣。

技術領域

本發明屬于核酸提取技術領域，具體涉及一種石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結合液、試劑盒及方法。

背景技術

石蠟切片樣本DNA提取過程中，因組織已經完全脫去水，包埋于石蠟固體中，組織中的核酸與蛋白質、石蠟緊緊的交聯在一起，使得從石蠟切片樣本中提取核酸DNA非常困難。一般而言，從石蠟切片樣本中提取核酸，需經過組織樣本脫蠟復水、蛋白酶K消化組織、裂解液將DNA與蛋白質等物質解交聯、DNA提取純化等步驟。

目前石蠟切片樣本DNA提取方法及試劑盒絕大部分還是以手工操作為主，整個操作流程需耗時4個小時以上；也有很少部分可以采用自動化儀器提取，但此類自動化儀器需要具有機械臂移液功能，加熱模塊及磁吸附模塊等，屬于較大型的自動工作站，雖然單次提取通量高，但整個工作站儀器昂貴，安裝運營成本高，適用性不高，不適合單次提取樣本數量少，應用靈活場景的單位，如經費較少的科研機構、高校實驗室及相關企事業單位等。近年來小型化、較少通量的半自動化核酸提取儀發展迅速，小型化核酸提取儀已經廣泛應用于市場上。

小型化、較少通量的自動提取儀的特點為僅通過移動磁棒的方式，將吸附有DNA的吸附DNA的磁珠在各buffer溶液中轉移，通過磁棒的螺旋振動等方式將吸附DNA的磁珠與試劑溶液混勻，并最終達到核酸提取純化的目標，整個過程沒有液體移取步驟，這就使得很多需要分步添加試劑的核酸提取試劑無法應用在此類自動化提取儀上。目前此類小型化半自動核酸提取儀已廣泛應用于如血液DNA提取、唾液DNA提取、口腔拭子DNA提取、肌肉組織DNA的提取。

常規的手動法石蠟切片樣本DNA提取試劑盒或者基于移液工作平臺的石蠟切片樣本DNA提取試劑盒，其一般提取流程為：①石蠟切片樣本二甲苯脫蠟，手動吸取或機械臂吸取一定體積的二甲苯溶液加入到有石蠟切片樣本的反應孔中，溶蠟后再吸棄二甲苯溶液；②吸取無水乙醇加入到已脫蠟的石蠟切片樣本中，洗滌殘留的二甲苯溶液，再吸棄無水乙醇；③加熱裝置將FFPE殘留的無水乙醇烘干；④接著手動或者儀器機械臂吸取蛋白酶K與組織裂解液加入到第③步的樣品管中，50～60℃孵育30～60分鐘后，再手動或者儀器機械臂吸取一定體積的DNA結合液加入到第④步溶液中，用吸頭吹打方式混勻液體；⑤加入一定體積的無水乙醇后，將全部液體轉移至DNA吸附膜，或者加入DNA吸附吸附DNA的磁珠；⑥再進行兩步洗滌純化步驟，得到最終的石蠟切片樣本DNA溶液。因此石蠟切片樣本DNA提取操作步驟繁瑣，而在整個提取過程中需要經過多次吸液移液過程，無法適配應用于無機械臂移取液體的半/全自動小型核酸提取儀上，而一般的高校實驗室、樣本量較少的企事業單位在無能力購買或者無必要購買較大型的且昂貴的移液工作站設備情況下，只能手工操作提取，不但耗時長而且嚴重制約生產效率。

發明內容

基于此，本發明提供一種石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結合液、試劑盒及方法。所述脫蠟裂解結合液可將樣本脫蠟、組織裂解和DNA結合在一步中完成，簡化了操作步驟，有效節省了操作時間和人力成本，適用范圍廣。

本發明的目的之一在于提供一種石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結合液。

具體技術方案為：