[發(fā)明專利]一種石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結(jié)合液、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911415475.6
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111057704B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱方何;陳嘉昌;胡朝暉;任勝強(qiáng);王慶;柳俊;劉鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市金圻睿生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州廣典知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香

1.一種均一液態(tài)的石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結(jié)合液，其特征在于，所述脫蠟裂解結(jié)合液包含以下濃度的組分：石蠟油30~40v/v%、無水乙醇5~8.5v/v%、Tris-HCl 50~400mM、鹽酸胍3~6M、尿素2.5~4M、NaCl 0.2~0.8M、SDS 0.5~3.5 w/v%、曲拉通X-100 0.2~0.8v/v%、亞精胺0.2~0.8w/v%，余量為水;

所述脫蠟裂解結(jié)合液的pH值為4.5~6.5；

所述脫蠟裂解結(jié)合液還包含終濃度為0.5~1.5mg/mL蛋白酶K。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解液，其特征在于，所述蛋白酶K在所述脫蠟裂解結(jié)合試液中的濃度是：0.8-1.2mg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結(jié)合液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將Tris-HCl、鹽酸胍、尿素、NaCl、SDS、曲拉通X-100和亞精胺溶解于水中，混勻，得到水相試劑；

（2）將液態(tài)脫蠟試劑石蠟油加入無水乙醇中，混勻，得到油相試劑；

（3）向步驟（2）的油相試劑中加入步驟（1）獲得的水相試劑，然后加入余量水，混勻，得到脫蠟裂解結(jié)合液。

4.一種石蠟切片樣本DNA提取試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結(jié)合液、吸附DNA的磁珠。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的石蠟切片樣本DNA提取試劑盒，其特征在于，還包括有洗滌液、漂洗液、DNA洗脫液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的石蠟切片樣本DNA提取試劑盒，其特征在于，所述洗滌液包含以下濃度的組分：鹽酸胍10~70 w/v%、曲拉通X-100 1~20v/v%。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的石蠟切片樣本DNA提取試劑盒，其特征在于，所述漂洗液包含以下濃度的組分：無水乙醇50~80 v/v%、NaCl 0.1~0.5M。

8.一種石蠟切片樣本DNA提取方法，其特征在于，包含以下步驟：

（1）向石蠟切片樣本中加入權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的石蠟切片樣本DNA提取的脫蠟裂解結(jié)合液，混勻，于60℃~70℃孵育60min~80min；

（2）向步驟（1）混合液中加入吸附DNA的磁珠，混勻；

（3）分離步驟（2）中的吸附DNA的磁珠；

（4）向吸附DNA的磁珠中加入洗滌液進(jìn)行洗滌，然后分離吸附DNA的磁珠，棄液體；

（5）向吸附DNA的磁珠中加入漂洗液進(jìn)行洗滌，然后分離吸附DNA的磁珠，棄液體；

（6）重復(fù)步驟（5）一次；

（7）向吸附DNA的磁珠中加入DNA洗脫液進(jìn)行洗脫；分離吸附DNA的磁珠，收集液體，即得到DNA溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的石蠟切片樣本DNA提取方法，其特征在于，于60℃~70℃孵育60min~80min包括：于60℃~70℃水浴鍋中放置60min~80min分鐘，期間每隔13-17分鐘迅速取出渦旋混勻并重新放回水浴鍋中。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的石蠟切片樣本DNA提取方法，其特征在于，于65℃孵育70min，期間每隔15分鐘迅速取出渦旋混勻并重新放回水浴鍋中。

11.根據(jù)權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)所述的石蠟切片樣本DNA提取方法，其特征在于，向步驟（1）混合液中加入吸附DNA的磁珠，混勻，包括：使步驟（1）混合液溫度恢復(fù)至15~30℃，然后加入吸附DNA的磁珠，渦旋混勻，靜置13~18min。