[發明專利]一種核酸提取試劑盒及提取核酸的方法

在審

• 申請號: 201911413714.4
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111041024A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 郭文滸;張書祖;薛怡婷;陳浩
• 申請（專利權）人: 阿吉安（福州）基因醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 段惠存

本發明公開了一種核酸提取試劑盒及提取核酸的方法，屬于分子生物學領域，該核酸提取試劑盒包括裂解液、洗滌液I和洗滌液II；所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二硫蘇糖醇和異硫氰酸胍該提取核酸的方法，將裂解液、核酸附著物和待提取樣品混合，得到吸附有核酸的核酸附著物；再依次采用洗滌液I、洗滌液II和洗脫液清洗吸附有核酸的核酸附著物，每次清洗后固液分離并收集上清液，得到核酸。本發明提供的核酸提取試劑盒和核酸提取方法，能夠充分有效地裂解細胞，裂解效率高，得到濃度更高、純度更高的核酸，保證后續操作的準確性，同時無需進行離心等操作，操作簡單，一次提取均在1h內，提高了提取的效率。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種核酸提取試劑盒及提取核酸的 方法。

背景技術

根據世界衛生組織(WHO)2012年公布的全球疾病負擔排序，下呼吸道感 染居第四位，僅次于缺血性心臟病、腦卒中和慢性阻塞性肺疾病；而在低收入 國家下呼吸道感染居死亡原因首位。目前國際上對肺炎進行長期動態的監測的 研究組織——美國和歐洲肺炎研究網絡(CAPO和CAPNEZ)，該組織已成立近 20年，為肺炎流行病學、病原診斷、治療方法和預防提供了大量的循證醫學證 據，但我國仍缺乏這方面的長期動態研究，尤其是對病毒性肺炎的認識更不足。

肺泡灌洗液是研究下呼吸道感染的一種最重要樣本類型，是作為病毒性肺 炎，細菌肺炎和真菌肺炎檢測較為理想的樣本，其陽性檢出率高于痰液；但肺 泡灌洗液的采樣，如BAL操作時混血，大氣道分泌物混入，吸引負壓大小，對 關系量回收量都會產生影響，采樣到微生物的量會存在很大差異，加之肺泡灌 洗液比較粘稠，對其中微生物的提取存在較大困難。

微生物核酸的提取是能否準確檢出病原菌的首要要素，現在市面上存在的 核酸提取試劑盒，有很少是專門針對肺泡灌洗液這類樣本的，BAL中提取微生 物核酸的就更為稀少了，這就會造成BAL中微生物的提取效率偏低，極有可能 出現假陰性的情況

發明內容

為了克服上述現有技術的缺陷，本發明所要解決的技術問題是：提供一種 用于提取肺泡灌洗液中核酸的核酸提取試劑盒及提取核酸的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種核酸提取試劑盒， 包括裂解液、洗滌液I和洗滌液II；所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二 硫蘇糖醇和異硫氰酸胍。

本發明采用的另一種技術方案為：一種提取核酸的方法，包括以下步驟：

步驟1、將裂解液、核酸附著物和待提取樣品混合，得到吸附有核酸的核酸 附著物；

步驟2、依次采用洗滌液I、洗滌液II和洗脫液清洗吸附有核酸的核酸附著 物，每次清洗后固液分離并收集上清液，得到核酸；

所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二硫蘇糖醇和異硫氰酸胍；

所述洗脫液為無核酸水。

本發明的有益效果在于：本發明提供的核酸提取試劑盒適用于肺泡灌洗液 中的核酸提取，能夠有效避免樣本中混血和分泌物的干擾，試劑盒中的裂解液 用于肺泡灌洗液的核酸提取，能破壞待提取樣品的細胞膜和或者細胞壁，高效 裂解樣本，使待提取樣品中的核酸絕大部分得到釋放，同時可保護核酸的穩定 與完整，配合洗脫液I和洗滌液II，所得核酸濃度更高，且穩定性和完整性更高， 使得提取效率最大化，得到高質量的核酸，確保后續應用的準確性和穩定性。 該試劑盒配方合理，能夠去除提取的核酸的雜質，獲得高純度的核酸，所得核 酸能夠直接用于瓊脂糖凝膠電泳檢測及聚合酶鏈式反應、酶切反應、基因文庫 構建等操作中。

具體實施方式

為詳細說明本發明的技術內容、所實現目的及效果，以下結合實施方式予 以說明。