[發(fā)明專利]一種丙型肝炎病毒抗體的均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911412171.4
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN113125712B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪琳;章春奇;葉春蕾;史夢(mèng)菲;田石磊;李臨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 科美博陽(yáng)診斷技術(shù)（上海）有限公司;科美診斷技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 劉建軍;吳大建

本發(fā)明涉及一種丙型肝炎病毒抗體的均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒以應(yīng)用。所述試劑盒包含表面鍵合有丙型肝炎病毒抗原的受體微球，所述受體微球能夠與活性氧作用產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)；所述受體微球還包括載體，所述載體的內(nèi)部填充有發(fā)光組合物，所述載體的表面鍵合有第一丙型肝炎病毒抗原；每毫克所述受體微球中的糖含量不高于40微克。所述試劑盒對(duì)丙型肝炎病毒抗體的檢測(cè)性能優(yōu)異。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種丙型肝炎病毒抗體的均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis?C?virus,HCV)感染引起的病毒性肝炎，患者感染丙型肝炎病毒1-3個(gè)月后可出現(xiàn)抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)，其病理改變以肝細(xì)胞壞死和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主，HCV引起的肝炎約80％發(fā)展為慢性肝炎，其中約25％發(fā)展為肝硬化、肝癌，對(duì)人類健康危害極大。目前，丙型肝炎血清學(xué)檢驗(yàn)已列入臨床患者輸血前、手術(shù)前以及各種創(chuàng)傷性檢查前等常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)防止丙肝傳播具有重要的意義。

目前HCV血清學(xué)檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫(ELISA)、膠體金法、化學(xué)發(fā)光(CLIA)、電化學(xué)發(fā)光(ECL)、時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)等。ELISA作為半定量檢測(cè)方法是現(xiàn)應(yīng)用最廣的檢測(cè)方法，但其靈敏度、線性寬度范圍均未達(dá)到較高水平，難以適應(yīng)市場(chǎng)發(fā)展的需求。膠體金法與ELISA均有相同的缺點(diǎn)。而CLIA及ECL雖靈敏度高但均存在檢測(cè)設(shè)備造價(jià)高昂，而相應(yīng)的標(biāo)記物研發(fā)門檻高，短時(shí)期內(nèi)國(guó)內(nèi)均會(huì)受制于人的缺點(diǎn)同樣也限制了在國(guó)內(nèi)的推廣。時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)靈敏度雖然靈敏度能達(dá)到CLIA一致的水平，但是檢測(cè)過程耗時(shí)較長(zhǎng)。

光激化學(xué)發(fā)光的基礎(chǔ)原理是一種均相免疫反應(yīng)。它是基于兩種微粒表面包被的抗原或抗體，在液相中形成免疫復(fù)合物而將兩種微粒拉近。在激光的激發(fā)下，發(fā)生微粒之間的離子氧的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而產(chǎn)生高能級(jí)的紅光，通過單光子計(jì)數(shù)器和數(shù)學(xué)擬合將光子數(shù)換算為靶分子濃度。而當(dāng)樣本不含靶分子時(shí)，兩種微粒間無法形成免疫復(fù)合物，兩種微粒的間距超出離子氧傳播范圍，離子氧在液相中迅速淬滅，檢測(cè)時(shí)則無高能級(jí)紅光產(chǎn)生。因此具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。但是，現(xiàn)有光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒存在制備成本較高、非特性吸附明顯等問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足提供了一種丙型肝炎病毒抗體的均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒對(duì)丙型肝炎病毒抗體的檢測(cè)性能優(yōu)異。

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種丙型肝炎病毒抗體的均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其包含表面鍵合有丙型肝炎病毒抗原的受體微球，所述受體微球能夠與活性氧作用產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)；所述受體微球還包括載體，所述載體的內(nèi)部填充有發(fā)光組合物，所述載體的表面鍵合有第一丙型肝炎病毒抗原；每毫克所述受體微球中的糖含量不高于40微克。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述載體表面沒有包被多糖物質(zhì)而直接與第一丙型肝炎病毒抗原結(jié)合。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施方式中，所述載體表面帶有羧基官能團(tuán)，所述第一丙型肝炎病毒抗原通過所述羧基官能團(tuán)與所述載體直接化學(xué)鍵合。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述載體表面羧基官能團(tuán)的密度不低于10nmol/mg，優(yōu)選不低于30nmol/mg。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施方式中，所述試劑盒包括試劑1，所述試劑1中含有第一緩沖液以及懸浮在其中的所述受體微球；所述受體微球在試劑1中的濃度為10～150μg/ml；優(yōu)選為20～100μg/ml；進(jìn)一步優(yōu)選為25～85μg/ml。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述受體微球在試劑1中的粒徑分布變異系數(shù)CV值不高于20％。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施方式中，所述受體微球在試劑1中的粒徑分布變異系數(shù)CV值不低于5％。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述第一緩沖溶液中含有多糖，所述多糖的濃度為0.01wt％～1wt％，優(yōu)選為0.05wt％～0.5wt％。