[發明專利]A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白、蛋白籠納米顆粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201911411903.8
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111171157A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 郭玉堃;于朋偉;郭豫杰;曾磊;楊國宇
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K1/22;C12N1/21;A61K39/135;A61K47/64;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

1.A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白，其特征在于，包括親和標簽、促溶標簽、A型FMDV1D蛋白表位和鐵蛋白片段，所述促溶標簽位于親和標簽的C端，所述A型FMDV 1D蛋白表位位于促溶標簽的C端，所述鐵蛋白片段位于A型FMDV 1D蛋白表位的C端，親和標簽為EW29標簽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，促溶標簽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2～9所示；該A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白可自組裝形成鐵蛋白包封A型FMDV 1D蛋白的蛋白籠納米顆粒。

2.根據權利要求1所述的A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白，其特征在于，所述A型FMDV1D蛋白表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述鐵蛋白片段的氨基酸序列如SEQ IDNO.11所示。

3.根據權利要求1所述的A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白，其特征在于，表達所述EW29標簽的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，表達所述促溶標簽的核苷酸序列如SEQ IDNO.13～20所示。

4.根據權利要求2所述的A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白，其特征在于，表達所述A型FMDV 1D蛋白表位的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示；表達所述鐵蛋白片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。

5.權利要求1～4任一項所述的A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白自組裝形成的蛋白籠納米顆粒。

6.權利要求5所述的蛋白籠納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：將A型FMDV 1D蛋白的核苷酸序列和鐵蛋白片段的核苷酸序列串聯，合成A型FMDV 1D蛋白表位-鐵蛋白片段；

步驟2：將A型FMDV 1D蛋白表位-鐵蛋白片段與促溶標簽相連，得到促溶標簽/A型FMDV1D蛋白表位-鐵蛋白片段，再將半乳糖結合凝集素EW29作為親和標簽與促溶標簽/A型FMDV1D蛋白表位-鐵蛋白片段進行串聯，形成重組序列，將重組序列連接至表達載體，構建重組載體；

步驟3：將重組載體轉化到大腸桿菌感受態細胞中，經過誘導表達和親和層析純化，得到目的蛋白A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白；純化的目的蛋白進行自組裝形成蛋白籠納米顆粒。

7.一種重組載體，其特征在于，所述的重組表達載體包含有如權利要求3～4任一項所述的核苷酸序列。

8.一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞包含有權利要求7所述的重組載體。

9.權利要求1～4所述的A型FMDV 1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白、權利要求5所述的A型FMDV1D蛋白-鐵蛋白融合蛋白自組裝形成的蛋白籠納米顆粒、權利要求6所述的蛋白籠納米顆粒的制備方法在制備A型FMDV 1D蛋白疫苗中的應用。