[發明專利]一種裂解結合液及糞便磁珠法核酸提取

在審

• 申請號: 201911409237.4
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110904098A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 王少平;秦偉;孟祥和;高龍
• 申請（專利權）人: 杭州?；锛夹g有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 金方瑋

1.一種裂解結合液，其特征在于，配方包括：10-100mM緩沖液，2-50mM的EDTA，pH6.5-8.0，0.65M-1.5M的NaCl，1％-5％的十六烷基三甲基溴化銨CTAB，0.5-5％的PVP-40，0.5％-10％的PEG2000-PEG8000。

2.根據權利要求1所述的一種裂解結合液，其特征在于，配方包括：50-100mM緩沖液，10-20mM EDTA，pH6.5-7.5，1M-1.5M NaCl，1％-3％的十六烷基三甲基溴化銨CTAB，1-3％的PVP-40，5％-10％的PEG2000-PEG6000。

3.根據權利要求2所述的一種裂解結合液，其特征在于，100mM緩沖液，10mM EDTA，pH7.0，1M NaCl，3％的十六烷基三甲基溴化銨CTAB，1％ PVP-40，5％ PEG6000。

4.根據權利要求1所述的一種裂解結合液，其特征在于，緩沖液為Tris-HCl。

5.一種糞便磁珠法核酸提取，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，取待檢樣本，加入裂解結合液，震蕩混勻后，加熱，離心；

所述裂解結合液的配方包括：10-100mM緩沖液，2-50mM EDTA，pH6.5-8.0，0.65M-1.5M的NaCl，1％-5％的十六烷基三甲基溴化銨CTAB，0.5-5％的PVP-40，0.5％-10％的PEG2000-PEG8000；

步驟二，取離心后的上清液到另一離心管中，加入RNase酶，混勻，靜置，再加入磁珠混勻；

步驟三，置于磁力架上吸附磁珠后，棄上清；再加入洗滌液，顛倒混勻，置于磁力架上吸附磁珠，棄上清，重復一次；

步驟三，離心管開蓋晾干；

步驟四，加入洗脫液，震蕩混勻；

步驟五，離心后，置于磁力架上吸附磁珠，取上清于另一離心管中待用。

6.根據權利要求5所述的一種糞便磁珠法核酸提取，其特征在于，所述洗滌液的配方包括：終濃度為10-100mM的Tris-HCl，pH7.0-9.0，5％-10％的PEG6000，0.2-1.0M的NaCl溶液。

7.根據權利要求6所述的一種糞便磁珠法核酸提取，其特征在于，所述洗滌液的配方包括：終濃度為50mM的Tris-HCl，pH8.0，5％的PEG6000，0.5M的NaCl溶液。

8.根據權利要求5所述的一種糞便磁珠法核酸提取，其特征在于，所述洗脫液的配方包括：終濃度為10-50mM的Tris-HCl，pH7.0-9.0，1-10mM的EDTA。

9.根據權利要求8所述的一種糞便磁珠法核酸提取，其特征在于，所述洗脫液的配方包括：終濃度為10mM的Tris-HCl，pH8.5，2mM的EDTA。