[發明專利]一種污染物對斑馬魚生物毒性影響的評價方法

在審

• 申請號: 201911409214.3
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111189999A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 穆希巖;李應仁;劉佳;袁立來;黃瑛;朱鋒;李緒興
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 張擁

1.一種污染物對斑馬魚生物毒性影響的評價方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a)采用斑馬魚胚胎、斑馬魚仔魚和斑馬魚成魚分別進行毒性試驗，分別獲得不同生長階段斑馬魚的LC₅₀值和/或亞致死劑量；

(b)選取LC₅₀值和/或亞致死劑量最低的生長階段斑馬魚作為最敏感階段斑馬魚；

(c)采用最敏感階段斑馬魚的LC₅₀值和/或亞致死劑量評價污染物的毒性強弱。

2.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于，所述毒性試驗為水源性暴露試驗；

所述水源性暴露試驗包括：先進行預實驗，獲得最高無影響污染物濃度和最低全致死污染物濃度；

在最高無影響污染物濃度和最低全致死污染物濃度之間配制梯度濃度的含有污染物的培養液，并分別對斑馬魚胚胎進行暴露，且每天記錄所有斑馬魚的發育情況。

3.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎亞致死指標包括：畸形、心跳減緩、發育遲緩和自主運動次數減少；所述畸形包括卵黃囊水腫和心包水腫；所述發育遲緩包括孵化延遲和體長下降；

所述斑馬魚仔魚亞致死指標包括：體長下降、脊柱彎曲和心跳次數減緩；

所述斑馬魚成魚亞致死指標為運動異常；所述運動異常為游動失衡、翻轉或游動減少。

4.根據權利要求3所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎亞致死致毒劑量通過如下方法確定：

先采用單因素方差分析法，確定污染物處理組和空白對照組之間同一指標的顯著差異性，通過與空白對照組相比具有顯著性差異的最低污染物濃度為該指標的致毒劑量，在所有指標中選擇致毒劑量最低的污染物濃度為所述斑馬魚胚胎亞致死致毒劑量。

5.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述暴露過程中每天更換不低于70％的培養液。

6.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎進行毒性試驗時，所述暴露過程中培養液溫度為27～28℃，每天光照時間和黑暗時間比例為(6～8)∶5。

7.根據權利要求4所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎在發育囊胚期前進行暴露。

8.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚成魚進行毒性試驗前，先對所述斑馬魚成魚進行馴養；

所述馴養為將斑馬魚成魚在經曝氣去氯處理，pH為7.0～8.5，溶氧量大于空氣飽和值的80％，水質硬度為175～225mg/L，溫度為26～28℃的水中馴養14天以上，所述馴養期間每天飼喂斑馬魚成魚體重0.9～1.1％的飼料，并且每天更換30～35％的水。

9.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚仔魚為胚胎孵化后3天，且能自主游動的斑馬魚；

所述斑馬魚成魚為體長為3.00～4.00cm，體重為0.15～0.30g的斑馬魚。

10.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于，所述斑馬魚為野生斑馬魚。