[發(fā)明專利]一種新型骨組織工程支架及其制備方法

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• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111494719A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設計）人: 史強;趙瑞波;朱勇;陳燦;許琰;閆少杭
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫(yī)院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/36;A61L27/56
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

1.一種骨組織工程支架，其特征在于，包括骨材料和外泌體，所述骨材料具有孔洞，所述外泌體通過負載于凝膠而分布于孔洞中。

2.如權利要求1所述的骨組織工程支架，其特征在于，所述孔洞的孔徑為50-200μm，孔深約0.5-2mm；

優(yōu)選地，所述孔洞的孔徑為80-100μm，孔深為0.5-1mm；

或優(yōu)選地，所述孔洞的間距為0.3-0.5mm；

或優(yōu)選地，所述骨材料的孔隙率為30-50％。

3.如權利要求1所述的骨組織工程支架，其特征在于，所述骨材料為哺乳動物股骨；

優(yōu)選地，所述哺乳動物選自人、鼠或兔；

或優(yōu)選地，所述股骨經(jīng)過脫細胞和脫鈣處理。

4.如權利要求1所述的骨組織工程支架，其特征在于，所述凝膠包括纖維蛋白膠、海藻酸鈉水凝膠和殼聚糖凝膠中的一種或多種。

5.如權利要求1所述的骨組織工程支架，其特征在于，所述外泌體高表達DMBT1；

優(yōu)選地，所述外泌體來源于hUSCs；

優(yōu)選地，所述hUSCs經(jīng)過基因工程插入DMBT1基因，高表達DMBT1。

6.一種骨組織工程支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對骨組織進行打孔得多孔骨組織；

(2)多孔骨組織脫鈣；

(3)多孔骨組織脫細胞；

(4)注射負載外泌體的纖維蛋白溶液，凝固成膠；

優(yōu)選地，所述孔洞的孔徑為50-200μm，孔深為0.5-2μm；

更為優(yōu)選地，所述孔洞的孔徑為80-100μm，孔深為0.5-1mm；

或優(yōu)選地，所述孔洞的間距為0.3-0.5mm；

或優(yōu)選地，所述骨材料的孔隙率為30-50％。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的脫鈣的方法包括化學試劑法、物理法或生物試劑法；

優(yōu)選地，所述脫細胞步驟包括：

(8)將步驟(2)的多孔骨組織置于A溶液中15-30h；

(9)放入B溶液8-20h；

(10)放入C溶液15-30h；

(11)放入D溶液8-20h；

(12)冷凍干燥和消毒，即得脫細胞的多孔骨組織；

所述A溶液為含為0.1％～2％(w/v)SDS和0.1％～1％(v/v)TritonX-100的PBS溶液；

所述B液為含0.1％～2％(w/v)的雙抗PBS溶液；

所述C液為含有500-800U/mL DNase Type I和1-2mg/mL RNase的PBS溶液；

所述D液為含0.1％～2％(w/v)的雙抗PBS溶液。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中負載外泌體的纖維蛋白溶液的制備方法為將外泌體溶解于纖維蛋白原溶液，加入凝血酶原混合均勻；

優(yōu)選地，所述纖維蛋白原溶液與凝血酶原體積比為1～5：1；

或優(yōu)選地，所述凝血酶原的濃度為500-1200U/mL；

優(yōu)選地，所述纖維蛋白溶液中外泌體的濃度為100μg/mL～300μg/mL；

優(yōu)選地，所述外泌體高表達DMBT1；

優(yōu)選地，所述外泌體來源于hUSCs；

優(yōu)選地，所述hUSCs經(jīng)過基因工程插入DMBT1基因，高表達DMBT1。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述骨材料為哺乳動物股骨；

優(yōu)選地，所述哺乳動物選自人、鼠或兔。

10.一種如權利要求1-5任一所述的骨組織工程支架或如權利要求6-9任一所述的方法在制備骨修復材料中的應用。