[發明專利]一種獼猴桃對潰瘍病抗性的鑒定方法

在審

• 申請號: 201911408112.X
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111057741A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 朱立武;葉振風;賈兵;何道秋;衡偉;劉莉;劉普
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/04;C12N1/20;C12R1/38
• 代理公司: 安徽匯樸律師事務所 34116
• 代理人: 劉海涵

1.一種獼猴桃對潰瘍病抗性的鑒定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟1、制備接菌器官

在春季時將獼猴桃不同種類品種一年生嫁接苗進行盆栽，當新梢生長至3-6個月時，選擇完全木質化的新梢節間作為獼猴桃潰瘍病菌的接種器官，每個新梢節選定3-5個接種點

步驟2、菌株活化定量

菌株活化：將獼猴桃潰瘍病菌的菌株置于-80℃冰箱長久保存，接種前取出部分-80℃保存的菌種，置于液體KB培養基中，25℃活化48小時，獲得活化后的菌液，然后取部分活化后的菌液接種于固體KB培養基斜面，25℃培養，48小時，4℃保存，獲得準備液；其余活化后的菌液加入甘油置于-80℃留作備份

菌株定量：調整準備液的濃度至10⁸CFU/mL，獲得接種細菌懸浮液

步驟3、接種

用潔凈的牙簽，蘸取約2μL的細菌懸浮液，穿刺嫁接苗新梢第二、三、四節間，深達木質部，單盆小區，三次重復，清水對照；各品種盆栽苗順序排列，置于溫度20℃、相對濕度90％的人工氣候室培養；接種后一周，開始觀察其發病情況

步驟4、鑒定抗性

接菌20天后，在發病部位剝去長約15mm、寬約5mm的韌皮部，用游標卡尺測量每個品種各接種點發病病斑縱徑大小，并對數據做差異顯著性分析；新梢病斑縱徑越大，表示該品種對獼猴桃潰瘍病抗性越弱。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中還包括為保證菌種活性，在試驗期間4℃保存的菌液需每兩周更新一次；步驟2所有的操作均需在超凈工作臺中完成。