[發(fā)明專利]一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911407961.3
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110904083A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周長春;房華;周鳳云;李敦貴;左權(quán);黃敬尊;崔成岺
• 申請（專利權(quán)）人: 沂源康源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C12N1/14;C12R1/685
• 代理公司: 淄博川誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 37275
• 代理人: 劉子成

1.一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于包括以下步驟：

(1)試管斜面菌種制備：

斜面培養(yǎng)基包括蔗糖3％、硝酸鈉0.2％、磷酸氫二鉀0.1％、硫酸鎂：0.05％氯化鉀0.05％、硫酸亞鐵0.01％、瓊脂2％，調(diào)節(jié)Ph6.0～6.2，電爐上加熱煮沸充分溶解，用玻璃移液管吸培養(yǎng)基分裝到的玻璃試管中，塞好棉塞，用紙包好，在121℃、0.1Mpa條件下滅菌30min，滅菌完成后試管傾斜置于超凈臺內(nèi)，冷卻凝固，斜面占試管長度的2/3，將黑曲霉菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；

(2)搖瓶菌種制備：

搖瓶培養(yǎng)基包括葡萄糖4％、酵母粉0.3％、豆餅粉1％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸鎂0.02％，控制Ph5.5～6.0，在121℃、0.1Mpa條件下滅菌30min，冷卻，斜面試管接種于搖瓶中進行培養(yǎng)；

(3)種子罐菌種擴繁：

種子罐培養(yǎng)基包括麥芽糊精5.6％、蛋白胨3.0％、葡萄糖5.0％、麩皮4％、消泡劑0.1％，將上述配料按比例加入蒸煮罐內(nèi)，加水?dāng)嚢枞芙猓羝訜嶂?0℃，轉(zhuǎn)移到種子罐，冷卻至35℃接入培養(yǎng)好的搖瓶菌種，培養(yǎng)得到成熟的液體種子；

(4)發(fā)酵培養(yǎng)：

以麩皮1000kg、葡萄糖20kg、硫酸銨5kg、酵母膏5kg為原料，加水800kg，充分混勻，在125℃條件下滅菌30min，冷卻降溫至32℃；向物料內(nèi)接種液體種子，接種量為物料質(zhì)量的20％，接種溫度32℃；接種完成后，進行淺盤發(fā)酵培養(yǎng)；最后，物料烘干制粉，即得成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的黑曲霉菌株為黑曲霉AS 3.350。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的黑曲霉菌株的蛋白酶活力≥70000U/g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的步驟(1)中的培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30℃、培養(yǎng)時間48小時。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的步驟(2)中的培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速180r/min，培養(yǎng)溫度31～33℃，培養(yǎng)時間40h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的步驟(3)中的培養(yǎng)條件為溫度30℃±1℃、通風(fēng)量12m³/h、罐壓0.04Mpa～0.08Mpa、培養(yǎng)時間48h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的步驟(4)中的培養(yǎng)條件為相對濕度保持在90％、室溫28℃、料溫28～33℃，培養(yǎng)時間5天。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述的步驟(4)中制粉的要求是40目篩網(wǎng)過篩率達到80％以上。