[發(fā)明專利]具有與HPG I結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白及其制備方法和應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN113121694B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孟媛;鐘冬梅;周全興;游輝;范凌云
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞市朋志生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/68;G01N33/573;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 秦冉冉

本發(fā)明涉及一種有利于提高親和力和活性的具有與HPG I結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)部分已有的能特異地結(jié)合HPG I的抗體序列，對其中部分氨基酸序列、特別是可變區(qū)的數(shù)個氨基酸序列進(jìn)行修改、突變，從而得到上述結(jié)合蛋白。通過實驗驗證，上述結(jié)合蛋白能特異性的結(jié)合HPG I，其特異性強(qiáng)，靈敏度高，活性和親和力均達(dá)到或高于當(dāng)前市場產(chǎn)品，可用于科研或檢測領(lǐng)域?qū)PG I的特異性檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程和生物檢測領(lǐng)域，尤其是涉及一種具有與HPG I結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃蛋白酶原(PG)是由細(xì)胞合成，并以不具有活性的酶原顆粒形式貯存在細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)充滿酶原顆粒時，其對新的酶原的產(chǎn)生具有負(fù)反饋作用。分泌進(jìn)入胃腔內(nèi)的胃蛋白酶原在胃酸的作用下，從分子中解離出一個小分子多肽，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩锘钚缘奈傅鞍酌浮Ｒ鸭せ畹奈傅鞍酌笇ξ傅鞍酌冈灿屑せ钭饔谩?/p>

根據(jù)胃蛋白酶原的生化性質(zhì)和免疫原性可將其分成2個亞群，組分1～5的免疫原性相同，稱為胃蛋白酶原I(PG I)，主要由胃底腺的主細(xì)胞和黏液頸細(xì)胞分泌；組分6和7被稱為胃蛋白酶原II(PG II)，除由胃底腺的主細(xì)胞和黏液頸細(xì)胞分泌外，賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液頸細(xì)胞以及十二指腸上段也能產(chǎn)生。

通常情況下，人體約有1％的胃蛋白酶原透過胃黏膜毛細(xì)血管進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)入血液循環(huán)的胃蛋白酶原在血液中含量非常穩(wěn)定。血清中PG I和PG II可以反映胃黏膜腺體和細(xì)胞的數(shù)量，也間接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。當(dāng)胃黏膜發(fā)生病理變化時，血清中胃蛋白酶原的含量也隨之改變。因此，監(jiān)測血清中胃蛋白酶原的濃度可以作為監(jiān)測胃黏膜狀態(tài)的手段。

血清中PG I是檢測胃泌酸腺細(xì)胞功能的指標(biāo)之一，胃酸分泌增多則PG I升高，分泌減少或胃粘膜腺體萎縮PG I降低；PG II與胃底粘膜病變的相關(guān)性較大，PG II升高與胃底腺管萎縮、胃上皮化生或假幽門腺化生、異型增值有關(guān)；PG I/II比值進(jìn)行性降低與胃粘膜萎縮進(jìn)展相關(guān)。因此，測定PG I、PG II及其比值有重要的作用，PG I和PG II可作為胃炎、胃癌等多種胃部疾病的診斷標(biāo)志物，相比胃鋇餐造影、胃鏡等傳統(tǒng)檢測手段，具有準(zhǔn)確、無創(chuàng)、安全的優(yōu)勢。

目前臨床上用于檢測HPG I(人PG I)的方法有酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法、流式熒光發(fā)光法、時間分辨熒光免疫分析法、光激化學(xué)發(fā)光免疫分析法、膠體金等，不同方法都有各自的優(yōu)缺點，但是都需要針對于HPG I的特異性單克隆抗體。目前國內(nèi)用于檢測HPG I的單克隆抗體大都自外國采購，用于配對檢測時可選擇的不多，市場上對于活性和親和力好的單克隆抗體存在強(qiáng)烈的需求。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種高活性和親和力的具有與HPG I結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下。

一種具有與HPG I結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白，其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括下述至少一個互補(bǔ)決定區(qū)，或者其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與下述至少一個互補(bǔ)決定區(qū)具有至少80％的序列同一性且與HPG I具有K_D≤8.36E-09mol/L的親和力：

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH1是G-N-X1-F-T-X2-S-X3-M-H，其中：X1是S或T；X2是T或S；X3是W或F；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH2是I-H-X1-H-S-G-N-X2-N-Y-X3-E-K-F，其中：X1是A或P；X2是T或S；X3是Q、D或N；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH3是R-X1-T-G-X2-F-X3-Y，其中：X1是N或Q；X2是A或P；X3是E或D；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VL1是Q-X1-V-X2-S-X3-V-A，其中：X1是T或S；X2是S或T；X3是E或D；