[發明專利]一種分離胎盤源造血干細胞的方法

有效

• 申請號: 201911401892.5
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110878283B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 邊曙光;張鳳寧;汪國云;曾智芃;明凱
• 申請（專利權）人: 貴州泛特爾細胞生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 劉永來

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種分離造血干細胞的方法，具體涉及一種分離胎盤源造血干細胞的方法。本法從胎盤組織中分離得到造血干細胞，首先將胎盤組織切碎并進行沖洗過濾，然后再對組織塊進行動員處理，從組織塊中分離出位于血管內壁的造血干細胞。本法大大提高了胎盤源的造血干細胞的分離提取率，并縮短了制備時間，獲得的造血干細胞具有較高的生物活性。本方案獲得的造血干細胞可以用于取代骨髓、動員后外周血和臍帶血造血干細胞用于血液疾病等的治療中。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種分離造血干細胞的方法，具體涉及一種分離胎盤源造血干細胞的方法。

背景技術

造血干細胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)是存在于造血組織中的一群原始造血細胞，造血干細胞可定向分化、增殖為不同的血細胞系，并進一步生成血細胞。造血干細胞的來源主要有四個方面：骨髓造血干細胞、外周血造血干細胞、臍帶血造血干細胞、胎盤組織造血干細胞。胎盤組織中造血干細胞的含量大，利用胎盤造血干細胞進行造血干細胞移植能有效解決骨髓造血干細胞等干細胞的來源不足的問題，將有望取代骨髓、動員后外周血和臍帶血造血干細胞用于血液疾病等的治療中。

現有技術中大多采用灌洗的方法從胎盤組織中獲取胎盤干細胞，一般的操作流程為，取離體的胎盤組織，從臍動脈處灌入灌洗液，然后在臍靜脈處收集含有造血干細胞的灌洗液。但是現有技術的操作方法存在以下的問題：在灌洗過程中很容易出現胎盤組織中的血管栓塞和堵塞的現象，可能會造成整個灌洗過程不能順利進行，導致了不能從臍靜脈處充分收集胎盤組織中的干細胞，現有技術中可通過在灌洗液中加入一定量的抗凝劑解決堵塞問題，但抗凝劑的加入會影響造血干細胞狀態；另外，在胎盤組織中的造血干細胞部分位于血液中，很大一部分造血干細胞都附著于血管內皮，用灌洗的手段很難將附著于血管內皮的造血干細胞完全沖洗下來。

發明內容

本發明的目的在于提供一種分離胎盤源造血干細胞的方法，本方法可以從胎盤組織中分離獲得大量的造血干細胞。

為解決上述技術問題，本發明技術方案如下：

一種分離胎盤源造血干細胞的方法，包括以下步驟：

S1預處理步驟：將胎盤組織剪碎成組織塊Ⅰ；用生理鹽水沖洗組織塊Ⅰ，收集濾液Ⅰ和組織塊Ⅱ；

S2組織動員步驟：使用動員液對組織塊Ⅱ進行動員處理，得組織塊Ⅲ；所述動員液的成分包括AMD3100和基礎培養基；

S3細胞收集步驟：用生理鹽水沖洗組織塊Ⅲ，收集濾液Ⅱ；對濾液Ⅱ進行過濾和離心處理，收集下層細胞Ⅱ。

采用上述技術方案，技術原理如下：將胎盤組織清洗剪碎之后，通過沖洗過濾(是指把待處理的組織置于濾網上，同時使用生理鹽水(通常使用含有1％雙抗的生理鹽水)等液體沖洗該組織，將該組織中的粒徑較小的物質沖洗到收集容器中)，可以獲得含有造血干細胞的濾液Ⅰ，且組織塊Ⅱ中還含有大量的附著在血管內皮上的造血干細胞。使用動員液(含有動員劑AMD3100)處理組織塊Ⅱ，獲得組織塊Ⅲ(即為動員后的胎盤組織)。然后再對組織塊Ⅲ進行沖洗過濾，收集濾液Ⅱ，對集濾液Ⅱ進行過濾和離心處理獲得下層細胞Ⅱ(其中含有大量造血干細胞)。其中，AMD3100是一種CXCR4趨化因子受體拮抗劑，可以與造血干細胞上的CXCR4可逆性結合，干擾CXCR4與其配體的結合，阻斷CXCR4參與的生理過程，將造血干細胞動員出來。

有益效果：