[發(fā)明專利]一種分離胎盤源造血干細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911401892.5
• 申請(qǐng)日: 2019-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN110878283B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邊曙光;張鳳寧;汪國(guó)云;曾智芃;明凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州泛特爾細(xì)胞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0789
• 分類號(hào): C12N5/0789
• 代理公司: 重慶強(qiáng)大凱創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50217
• 代理人: 劉永來

1.一種分離胎盤源造血干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1預(yù)處理步驟：將胎盤組織剪碎成組織塊Ⅰ；用生理鹽水沖洗組織塊Ⅰ，收集濾液Ⅰ和組織塊Ⅱ；

S2組織動(dòng)員步驟：使用動(dòng)員液對(duì)組織塊Ⅱ進(jìn)行動(dòng)員處理，得組織塊Ⅲ；所述動(dòng)員液的成分包括AMD3100、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、Ⅰ型膠原酶和胎牛血清；胎牛血清和基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積比為（4-6）:100；AMD3100和所述組織塊Ⅱ的用量比（8-12）mg:1kg；Ⅰ型膠原酶在動(dòng)員液中的濃度為0.2-0.5mg/ml；對(duì)組織塊Ⅱ進(jìn)行動(dòng)員處理的溫度為37-39℃，動(dòng)員處理的時(shí)長(zhǎng)為30-90min；

S3細(xì)胞收集步驟：用生理鹽水沖洗組織塊Ⅲ，收集濾液Ⅱ；對(duì)濾液Ⅱ進(jìn)行過濾和離心處理，收集下層細(xì)胞Ⅱ；對(duì)濾液Ⅰ進(jìn)行過濾和離心處理，收集下層細(xì)胞Ⅰ；將下層細(xì)胞Ⅰ和下層細(xì)胞Ⅱ合并，獲得合并細(xì)胞；

S4除紅細(xì)胞步驟：將S3中的合并細(xì)胞用生理鹽水重懸，然后離心棄上清液，再加入羥乙基淀粉溶液，獲得分離體系Ⅰ；對(duì)分離體系Ⅰ進(jìn)行離心處理，并去除紅細(xì)胞層，獲得分離體系Ⅱ；對(duì)分離體系Ⅱ進(jìn)行離心處理，并去除血漿層，得有核細(xì)胞懸液；

S5細(xì)胞凍存步驟：將S4中的有核細(xì)胞懸液混勻后放入凍存袋，并在凍存袋中加入凍存液，將凍存袋封口后置于4℃冰箱暫存，利用程序降溫儀降溫至-80℃；然后將凍存袋置于-80℃冰箱中暫存；待檢測(cè)合格后，最后將然后將凍存袋置于液氮罐中長(zhǎng)期儲(chǔ)存；

清洗胎盤組織的方法為：使用含有雙抗的生理鹽水沖洗胎盤組織5-8次；組織塊Ⅰ的體積為0.1-1mm³。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離胎盤源造血干細(xì)胞的方法，其特征在于，在S1中，在剪碎胎盤組織之前，去除胎盤表面的羊膜組織，使用75%酒精溶液沖洗胎盤表面，并清洗胎盤組織。