[發明專利]脫敏治療藥物的活性檢測方法在審
| 申請號： | 201911401425.2 | 申請日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN113125744A | 公開（公告）日： | 2021-07-16 |
| 發明（設計）人： | 馬永;范宇 | 申請（專利權）人： | 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/535 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 213125 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 治療 藥物 活性 檢測 方法 | ||
1.一種變應原蛋白活性檢測方法，其特征在于，包含以下步驟：
步驟一、收集100份以上特異性IgE檢測值為10～150Kua/L的血清進行合并，制備得到標準血清庫，再測定標準血清庫IgE值；
步驟二、包被：用包被液將變應原蛋白樣品稀釋后加入包被孔中孵育；
步驟三、封閉：洗滌包被孔，并加入封閉液孵育；
步驟四、樣品稀釋：待測變應原蛋白樣品梯度稀釋；
步驟五、混合孵育：將上述稀釋的樣品分別與血清混合孵育；
步驟六、加樣孵育：孵育好的樣品加入包被孔，繼續孵育；
步驟七、二抗孵育：包被孔洗滌后加入二抗，孵育；
步驟八、顯色讀數；
步驟九、計算生物活性值：抑制率％＝(陽性值-樣品值)/陽性值，以抑制率％作為橫坐標，以Log10稀釋倍數為縱坐標，做二次曲線擬合；將50％抑制率代入曲線方程，計算出稀釋倍數；生物學活性值(BU/ml)＝稀釋倍數×100；比活(BU/mg)＝生物學活性值/蛋白濃度。
其中，陽性值：血清中總游離特異性IgE與包被蛋白結合時的檢測值。樣品值：血清中游離特異性IgE(總特異性IgE-被不同稀釋倍數的樣品結合掉的IgE含量)與包被蛋白結合的檢測值；
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述包被步驟，塵螨變應原蛋白包被反應條件選擇4℃孵育過夜；I型塵螨變應原蛋白包被緩沖液為碳酸緩沖液或磷酸緩沖液；II塵螨變應原蛋白包被緩沖液為磷酸緩沖液。
3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述樣品稀釋步驟，塵螨變應原蛋白樣品稀釋至20μg/mL后再進行梯度稀釋。
4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述樣品稀釋步驟，I型塵螨變應原蛋白稀釋后進行3倍梯度稀釋；II型塵螨變應原蛋白稀釋后進行6倍梯度稀釋。
5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述混合孵育步驟，I型塵螨變應原蛋白與11倍稀釋度的血清混合孵育；II型塵螨變應原蛋白與5倍稀釋度的血清混合孵育。
6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述加樣孵育步驟，蛋白與血清混合樣品加入包被孔后孵育2小時。
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