[發(fā)明專利]李斯特屬和6種常見李斯特菌特異性新分子靶標及其快速檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911400110.6
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111057776B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設計）人: 吳清平;李凡;葉青華;陳謀通;張菊梅;丁郁;吳詩;李瀅;韋獻虎;雷濤
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所(廣東省微生物分析檢測中心);廣東環(huán)凱生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭

1.核苷酸序列組合作為被檢測靶標在鑒別李斯特菌中的應用，其特征在于，所述核苷酸序列組合如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.16所示，所述應用為非疾病診斷和治療目的應用；

所述序列SEQIDNO.1用于鑒別李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.2用于鑒別單核細胞增生李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.3~5用于鑒別英諾克李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.6~8用于鑒別綿羊李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.9~13用于鑒別西式李斯特菌；所述序列SEQ IDNO.14用于鑒別威爾氏李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16用于鑒別格氏李斯特菌。

2.用于鑒別李斯特菌的引物組，其特征在于，所述引物組為根據(jù)如權利要求1所述核苷酸序列組合設計得到；

所述引物組的序列按5’到3’如SEQIDNO.17~48所示；其中：

SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18為對應SEQ ID NO.1序列的引物對；

SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20為對應SEQ ID NO.2序列的引物對；

SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22為對應SEQ ID NO.3序列的引物對；

SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24為對應SEQ ID NO.4序列的引物對；

SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26為對應SEQ ID NO.5序列的引物對；

SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28為對應SEQ ID NO.6序列的引物對；

SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30為對應SEQ ID NO.7序列的引物對；

SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32為對應SEQ ID NO.8序列的引物對；

SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34為對應SEQ ID NO.9序列的引物對；

SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36為對應SEQ ID NO.10序列的引物對；

SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38為對應SEQ ID NO.11序列的引物對；

SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40為對應SEQ ID NO.12序列的引物對；

SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42為對應SEQ ID NO.13序列的引物對；

SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44為對應SEQ ID NO.14序列的引物對；

SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46為對應SEQ ID NO.15序列的引物對；

SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48為對應SEQ ID NO.16序列的引物對；

所述序列SEQ ID NO.1用于鑒別李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.2用于鑒別單核細胞增生李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.3~5用于鑒別英諾克李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.6~8用于鑒別綿羊李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.9~13用于鑒別西式李斯特菌；所述序列SEQID NO.14用于鑒別威爾氏李斯特菌；所述序列SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16用于鑒別格氏李斯特菌。

3.如權利要求2所述引物組在鑒別李斯特菌中的應用，所述應用為非疾病診斷和治療目的應用。

4.一種非疾病診斷和治療目的的鑒別李斯特菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：使用如權利要求2所述引物組對待測樣品DNA進行PCR擴增；

S2：進行凝膠電泳檢測擴增產物；

S3：觀察引物組中各引物對對應產物大小的位置是否存在單一擴增條帶，如果存在，說明待測樣品中含有對應的李斯特菌；如果沒有出現(xiàn)相應的單一擴增條帶，則說明待測樣品中不含有對應的李斯特菌。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，S1中的PCR擴增體系包括PCR反應緩沖液、模板DNA、PCR聚合酶、dNTP、MgCl_2、引物組和滅菌雙蒸水。