[發明專利]一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝

在審

• 申請號: 201911399484.0
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110951725A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 董輝;金維榮;秦紅友;楊紅
• 申請（專利權）人: 申友基因組研究院（南京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 朱欣欣

1.一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于，步驟如下：

1)將1個試劑盒內含有的6個深孔板分別進行預分裝處理，將經過預分裝處理后的深孔板顛倒混勻、離心后，撕開深孔板的封膜，并在預分裝裂解結合液LB的深孔板孔中依次加入待測樣本和蛋白酶K；

2)通過核酸提取儀進行核酸的提取；

3)核酸提取程序完畢后，取出6個深孔板，第6板深孔板中的溶液即為核酸溶液。

2.根據權利要求1所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于，所述步驟(1)中6個試劑盒進行預分裝處理的步驟如下：

(a)在第一個深孔板內裝入裂解結合液LB；

(b)在第二個深孔板內裝入洗液W1；

(c)在第三個深孔板內裝入洗液W2；

(d)在第四個深孔板內裝入磁珠混液；

(e)在第五個深孔板內裝入洗液W3；

(f)在第六個深孔板內裝入洗脫液lowTE。

3.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于，所述步驟(a)中裂解結合液LB包括以下組分：異硫氰酸胍2～5mol/L、SDS 0.5～1％(w/v)、Tris-HCl20～50mmol/L、EDTA 5～10mmol/L、Nacl 20～50mmol/L、Triton X-100 0.2～1.5％(v/v)、Tween 20 0.2～1.0％(v/v)和PEG 400 5～30％(v/v)，其余為溶劑。

4.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于，所述步驟(b)中洗液W1包括以下組分：鹽酸胍2～4mol/L、Triton X-100 0.2～0.5％(v/v)、乙醇30～50％(v/v)，其余為溶劑。

5.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于，所述步驟(c)中洗液W2包括以下組分：PEG 6000 5～10％(w/v)和Nacl 20～50mmol/L，其余為溶劑。

6.根據權利要求3或4或5所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于：所述溶劑為無菌水。

7.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于：所述步驟(e)中洗液W3為75-80％(v/v)的乙醇。

8.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于：所述步驟(d)中磁珠混液包括以下組分：磁珠0.25-2ng/ml、75-80％(v/v)的乙醇。

9.根據權利要求2所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于：所述步驟(f)中洗脫液lowTE包括以下組分：Tris-HCl 10-30mmol/L、EDTA 1-5mmol/L。

10.根據權利要求1所述的一種基于磁珠法的一步法核酸提取工藝，其特征在于：所述每個深孔板均設有96個孔。