[發明專利]一種檢測靶核酸的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201911394951.0
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111073984A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 楊華衛;吳雨萌;林思琦
• 申請（專利權）人: 江蘇獵陣生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6804;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 北京聿華聯合知識產權代理有限公司 11611
• 代理人: 賈艷華

1.一種試劑盒，其包括：試紙條、第一探針，以及用于特異性PCR擴增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物；其中，

所述第一上游引物用于擴增所述靶核酸的第一正義片段，所述第一下游引物用于擴增所述靶核酸的第一反義片段，所述第一上游引物或所述第一下游引物標記有第一抗原，所述第一探針標記有第二抗原；當所述第一上游引物標記有第一抗原時，所述第一探針能夠與所述第一正義片段特異性配對，并且在所述第一探針與所述第一正義片段特異性配對后得到第一正義配對片段；當所述第一下游引物標記有第一抗原時，所述第一探針能夠與所述第一反義片段特異性配對，并且在所述第一探針與所述第一反義片段特異性配對后得到第一反義配對片段；

所述試紙條用于檢測所述第一正義配對片段或所述第一反義配對片段，所述試紙條上由近及遠的載有所述第一抗原的第一抗體和包被有能夠在反應后形成檢測線第二抗原的第二抗體，所述第一抗體標記有信號劑。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括第二探針，和用于特異性PCR擴增質控核酸的第二上游引物和第二下游引物，其中，

所述第二上游引物用于擴增所述質控核酸的第二正義片段，所述第二下游引物用于擴增所述質控核酸的第二反義片段，所述第二上游引物或所述第二下游引物標記有第一抗原，所述第二探針標記有第三抗原；當所述第二上游引物標記有所述第一抗原時，所述第二探針能夠與所述第二正義片段特異性配對，并且在所述第二探針與所述第二正義片段特異性配對后得到第二正義配對片段；當所述第二下游引物標記有第一抗原時，所述第二探針能夠與所述第二反義片段特異性配對，并且在所述第二探針與所述第二反義片段特異性配對后得到第二反義配對片段；

所述第一抗原、第二抗原和第三抗原兩兩不同；

所述試紙條還用于檢測所述第二正義配對片段或所述第二反義配對片段；所述試紙條上還包被有在反應后形成第一質控線的第三抗原的第三抗體，且所述檢測線與所述第一質控線間隔平行排列；

優選地，所述質控核酸為用于監測待測樣品的質量的內參質控核酸；

優選地，所述試紙條上還包被有在反應后形成第二質控線的第一抗體的第四抗體，且所述第二質控線與所述檢測線以及所述第一質控線分別間隔平行排列。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述第一探針的3’端和所述第二探針的3’端獨立地修飾有ddATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP中的一種；和/或

所述第一抗原、第二抗原和所述第三抗原獨立地為生物素、異硫氰酸熒光素、羧基熒光素、地高辛和羧基四甲基羅丹明中的至少一種，且所述FITC和FAM不同時使用；和/或

所述信號劑選自膠體金、熒光化合物、化學發光化合物中的一種；優選地，所述信號劑選自膠體金、FITC和吖啶酯中的一種。

4.根據權利要求1至3中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試紙條包括支撐底板、吸水紙、硝酸纖維素膜、金墊和樣品墊；其中，所述樣品墊、所述金墊、所述硝酸纖維素膜和所述吸水紙依次從近端到遠端固定在所述支撐底板的同一面上；

所述第二抗體以及任選地第四抗體包被在所述硝酸纖維素膜上，優選地，所述第三抗體也包被在所述硝酸纖維素膜上；

所述第一抗體載于在所述金墊上；

優選地，所述樣品墊和金墊獨立地為玻璃纖維膜；

優選地，所述試紙條還包括背膠和隔離紙，所述背膠貼和隔離紙依次覆蓋于在所述支撐底板的另一面，所述隔離紙上標有所述吸水紙、所述硝酸纖維素膜、所述金墊和所述樣品墊的位置。

5.根據權利要求1至4中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括用于密封所述試紙條的密封結構中以形成即時密封核酸檢測卡。