[發(fā)明專利]一種檢測靶核酸的試劑盒及方法

在審

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• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111073984A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設計）人: 楊華衛(wèi);吳雨萌;林思琦
• 申請（專利權）人: 江蘇獵陣生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6804;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 北京聿華聯(lián)合知識產權代理有限公司 11611
• 代理人: 賈艷華

本發(fā)明提供了一種檢測靶核酸的試劑盒及方法。所述試劑盒包括試紙條、探針，以及用于特異性PCR擴增靶核酸的上游引物和下游引物；其中，上游引物用于擴增正義片段，下游引物用于擴增反義片段，上游引物或下游引物標記有第一抗原，探針標記有第二抗原；當上游引物標記有第一抗原時，探針能夠與正義片段特異性配對，探針與正義片段特異性配對后得到正義配對片段；當下游引物標記有第一抗原時，探針能夠與反義片段特異性配對，并探針與反義片段特異性配對后得到反義配對片段；試紙條用于檢測正義配對片段或反義配對片段，試紙條上由近及遠的載有第一抗原的第一抗體和包被有能夠在反應后形成檢測線第二抗原的第二抗體，第一抗體標記有信號劑。

技術領域

本發(fā)明提供了一種檢測靶核酸的試劑盒及方法。

背景技術

結核病是全世界由單一致病菌引起死亡人數(shù)最多的疾病。目前我國仍是全球30個結核病高負擔國家之一，每年新發(fā)結核病患者約90萬例，位居全球第3位。

目前應用于結核分枝桿菌復合群診斷的技術有很多種。其中，傳統(tǒng)的涂片抗酸染色和細菌培養(yǎng)方法在一些結核病人中可能造成誤診或漏診。分子檢測技術的靈敏度在理論上可達一個結核分枝桿菌，靈敏度高，且短時間即可出報告，可以對結核病人早期診斷，并可以鑒別診斷肺結核和肺癌，但是普通PCR擴增或等溫擴增反應容易產生非特異性擴增產物而導致假陽性判讀結果，而且在實驗室環(huán)境有限時極易由核酸擴增產物污染造成檢測結果的假陽性；而熒光定量PCR雖然實現(xiàn)了不開蓋的檢測，提高了檢測的特異性，但是由于檢測儀器和檢測試劑昂貴，限制了其在基層單位上的使用；等溫膠體金試紙條使得基因檢測更加簡便，但是不能解決基因的非特異擴增問題而且目前市場上幾乎所有的基因檢測試劑盒的質控體系不完整不全面，一般只包含擴增質控，信號劑顯示質控，而對于樣本采集質量和樣本核酸提取質量均缺乏質控。

發(fā)明內容

本發(fā)明之一提供了一種試劑盒，其包括：試紙條、第一探針，以及用于特異性PCR擴增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物；其中，

所述第一上游引物用于擴增所述靶核酸的第一正義片段，所述第一下游引物用于擴增所述靶核酸的第一反義片段，所述第一上游引物或所述第一下游引物標記有第一抗原，所述第一探針標記有第二抗原；當所述第一上游引物標記有第一抗原時，所述第一探針能夠與所述第一正義片段特異性配對，并且在所述第一探針與所述第一正義片段特異性配對后得到第一正義配對片段；當所述第一下游引物標記有第一抗原時，所述第一探針能夠與所述第一反義片段特異性配對，并且在所述第一探針與所述第一反義片段特異性配對后得到第一反義配對片段；

所述試紙條用于檢測所述第一正義配對片段或所述第一反義配對片段，所述試紙條上由近及遠的載有所述第一抗原的抗體和包被有能夠在反應后形成檢測線第二抗原的第二抗體，所述第一抗原的抗體標記有信號劑。

在一個具體實施方式中，所述試劑盒中還包括第二探針，和用于特異性PCR擴增質控核酸的第二上游引物和第二下游引物，其中，

所述第二上游引物用于擴增所述質控核酸的第二正義片段，所述第二下游引物用于擴增所述質控核酸的第二正義片段，所述第二上游引物或所述第二下游引物標記有所述第一抗原，所述第二探針標記有第三抗原；當所述第二上游引物標記有第一抗原時，所述第二探針能夠與所述第二正義片段特異性配對，并且在所述第二探針與所述第二正義片段特異性配對后得到第二正義配對片段；當所述第二下游引物標記有第一抗原時，所述第二探針能夠與所述第二反義片段特異性配對，并且在所述第二探針與所述第二反義片段特異性配對后得到第二反義配對片段；

所述第一抗原、第二抗原和第三抗原兩兩不同；

所述試紙條還用于檢測所述第二正義配對片段或所述第二反義配對片段；所述試紙條上還包被有在反應后形成質控線的第三抗原的第三抗體，且所述檢測線與所述質控線間隔平行排列。