[發明專利]膠原支架的制備方法及膠原支架

有效

• 申請號: 201911394705.5
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111434358B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 萬綿水;林創鑫
• 申請（專利權）人: 廣東泓志生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50;A61L27/58
• 代理公司: 深圳市君之泉知識產權代理有限公司 44366
• 代理人: 呂戰竹

本發明提供了一種膠原支架的制備方法及膠原支架。制備方法包括步驟：對原材料組織進行清洗；對清洗后的原材料組織進行凍融循環處理得到第一中間物；對第一中間物進行脫脂處理得到第二中間物；對第二中間物進行脫細胞處理得到第三中間物；對第三中間物進行脫核酸處理得到第四中間物；將第四中間物進行洗滌和干燥處理，得到膠原支架；采用全能核酸酶溶液進行脫核酸處理，全能核酸酶的含量為100U/L至10000U/L。采用本申請提供的制備方法制備的膠原支架，其構成的三維空間可以促進種子細胞的增殖與遷移、提高種子細胞按照其原始表型表達的穩定性，促進細胞基質的分泌從而增加支架的堅固性。

技術領域

本發明涉及組織工程技術領域，具體涉及一種膠原支架的制備方法及膠原支架。

背景技術

組織工程(tissue engineering)，是一門以細胞生物學和材料科學相結合，進行體外或體內構建組織或器官的新興學科，其基本原理是，從機體獲取少量的活體組織，用特殊的酶或其他方法將細胞(又稱種子細胞)從組織中分離出來在體外進行培養擴增，然后將擴增的細胞與具有良好生物相容性、可降解性和可吸收的生物材料(支架)按一定的比例混合，使細胞黏附在生物材料(支架)上形成細胞-材料復合物；將該復合物植入機體的組織或器官病損部位，隨著生物材料在體內逐漸被降解和吸收，植入的細胞在體內不斷增殖并分泌細胞外基質，最終形成相應的組織或器官，從而達到修復創傷和重建功能的目的。生物材料支架所形成的三維結構為細胞獲取營養、生長和代謝提供了良好的環境。

現有方法制備的生物材料支架即膠原支架的總表面積較小且結構可靠性差，另外，現有方法僅能夠對單一原材料組織處理制備，適用范圍小。

發明內容

基于上述現狀，本發明的主要目的在于提供一種膠原支架的制備方法，以解決現有制備方法存在的上述問題。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明的第一方面提供了一種膠原支架的制備方法，所述制備方法包括步驟：

S100、對原材料組織進行清洗；

S200、對清洗后的原材料組織進行凍融循環處理得到第一中間物；

S300、對所述第一中間物進行脫脂處理得到第二中間物；

S400、對所述第二中間物進行脫細胞處理得到第三中間物；

S500、對所述第三中間物進行脫核酸處理得到第四中間物；

S600、將所述第四中間物進行洗滌和干燥處理，得到所述膠原支架；

其中，所述步驟S500中采用全能核酸酶溶液進行所述脫核酸處理，所述全能核酸酶的含量為100U/L至10000U/L，例如為100U/L、500U/L、1000U/L、1500U/L、2000U/L、2500U/L、3000U/L、3500U/L、4000U/L、4500U/L、5000U/L、5500U/L、6000U/L、6500U/L、7000U/L、7500U/L、8000U/L、8500U/L、9000U/L、9500U/L、10000U/L。

首先對原材料組織進行凍融循環處理，在凍融循環過程中形成結冰以及通過凍融循環的鹽溶液的濃度變化(凍融循環的冷凍過程中隨著溫度下降會導致未結冰水中的鹽的溶解度出現變化，鹽濃度逐漸上升，產生細胞膜內外濃度差)使得細胞破裂，從而提高細胞裂解效果，獲得更大的總表面積，從而更有利于組織的再生。

其次，由于不同的原材料組織的主要不同在于DNA和RNA不同，本申請的制備方法中設置有特定的脫核酸步驟，在該步驟利用全能核酸酶進行脫核酸處理，從而能夠降解所有形式的DNA和RNA，通用性強，適用范圍廣，可以適用于不同的單一原材料組織以及各種不同原材料組織的組合處理。原材料組織可以為豬、牛、羊等哺乳動物的適于作為原材料的組織或器官，例如心臟、肝臟、腎臟、膀胱、膈肌、大網膜、腸系膜等。