[發(fā)明專利]間充質(zhì)干細(xì)胞來源囊泡包裹三氧化二砷的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911392308.4
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN113116927A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉輝;劉曉;蘇艷;黃曉軍;黃波;劉玉英
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)人民醫(yī)院（北京大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院）
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P37/06;A61K33/36
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 王灝增

1.一種復(fù)合制劑的制備方法，其特征在于，包括：

1)將間充質(zhì)干細(xì)胞置于含有三氧化二砷的培養(yǎng)基中，先進(jìn)行紫外照射處理，后進(jìn)行培養(yǎng)，使間充質(zhì)干細(xì)胞釋放囊泡，

2)提取培養(yǎng)物中的囊泡，得到間充質(zhì)干細(xì)胞來源的囊泡包裹的三氧化二砷。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述1)中，三氧化二砷和所述間充質(zhì)干細(xì)胞的配比為3mg三氧化二砷：2×10⁷所述間充質(zhì)干細(xì)胞；

所述步驟1)中紫外照射處理時含有三氧化二砷的培養(yǎng)基中三氧化二砷的濃度為3/8～3/7mg/ml；培養(yǎng)時含有三氧化二砷的培養(yǎng)基中三氧化二砷的濃度為3/12-3/11。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，將間充質(zhì)干細(xì)胞置于含有三氧化二砷的培養(yǎng)基中，是所述間充質(zhì)干細(xì)胞的含量為4*個/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)紫外照射處理的紫外線強度為300J/m²，紫外線照射時間為90min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中培養(yǎng)條件為：37℃，5％CO₂條件下培養(yǎng)14小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中提取培養(yǎng)物中的囊泡的方法包括：

C1)離心,去除細(xì)胞碎片,取上清液；

C2)將步驟C1)中的上清液，第二次離心，去除細(xì)胞碎片，取上清液；

C3)將步驟C2)中的上清液，第三次離心，取沉淀；

C4)將步驟C3)中離心得到的沉淀進(jìn)行清洗，得到間充質(zhì)干細(xì)胞來源囊泡包裹三氧化二砷。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟C1)中的離心條件為：500g離心10min；所述步驟C2)中的離心條件為：14000g離心2min；所述步驟C3)中的離心條件為：14000g離心60min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源于新鮮臍帶，所述新鮮臍帶是指健康產(chǎn)婦離體24小時內(nèi)的臍帶。

9.權(quán)利要求1-8任一所述方法制備得到的間充質(zhì)干細(xì)胞來源囊泡包裹三氧化二砷。

10.權(quán)利要求10所述的的間充質(zhì)干細(xì)胞來源囊泡包裹三氧化二砷在制備預(yù)防和/或治療移植物抗宿主病和/或腫瘤藥物中的應(yīng)用。