[發(fā)明專利]一種培養(yǎng)免疫細胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911389986.5
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110938596A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設計）人: 賈在美;黃玉香;王芮;劉超;姜磊;李文菁
• 申請（專利權）人: 青島奧克生物開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種培養(yǎng)免疫細胞的方法，其特征在于，將來源于腹腔液的單個核細胞培養(yǎng)得到免疫細胞；

所述免疫細胞包括NK細胞和/或CIK細胞。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述免疫細胞為NK細胞時，將權利要求1所述的單個核細胞與NK細胞培養(yǎng)液、質量百分含量為8～12％的胎牛血清溶液、飼養(yǎng)細胞混合后，得到混合物，將所述混合物培養(yǎng)14d，得到NK細胞。

3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述單個核細胞的數(shù)量與NK細胞培養(yǎng)液的體積、質量百分含量為8～12％的胎牛血清溶液的體積、飼養(yǎng)細胞的數(shù)量比為2.5～3.5×10⁷cells:16～23ml:1.6～2.3ml:1.8～2.2×10⁷cells。

4.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述混合物接種于細胞培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，所述單個核細胞的接種密度為0.5～1.5×10⁶cells/ml。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，當使用培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時，培養(yǎng)第4d時，更換培養(yǎng)瓶，所述單個核細胞的接種密度為1.2～1.8×10⁶cells/ml，第4d至第6d維持細胞密度為1.2～1.8×10⁶cells/ml。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，第7d時，往培養(yǎng)瓶中添加飼養(yǎng)細胞，飼養(yǎng)細胞的添加量為7.2～8.8×10⁷cells/瓶。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述免疫細胞為CIK細胞時，將權利要求1所述的單個核細胞與CIK培養(yǎng)液混合后，將得到的混合物在37℃、5％CO₂下進行培養(yǎng)13d，得到CIK細胞。

8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述混合物接種于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)瓶的規(guī)格為175cm²。

9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)24h后，向培養(yǎng)瓶中添加CD3McAb、IL-2和IL-1α，使CD3McAb的終濃度為90～110ng/ml，IL-2的終濃度為900～1100U/ml，IL-1α的終濃度為900～1100U/ml。

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)第8d時，收集細胞，將細胞轉入培養(yǎng)袋中培養(yǎng)，每袋培養(yǎng)袋中含有180～220ml的CIK培養(yǎng)液；

培養(yǎng)第10d時，每袋培養(yǎng)袋中補加380～420ml的CIK培養(yǎng)液；

培養(yǎng)第12d時，每袋培養(yǎng)袋中補加180～220ml的CIK培養(yǎng)液。