[發明專利]一種免疫傳感器的制備及用于FSH抗體檢測的方法

在審

• 申請號: 201911384380.2
• 申請日: 2019-12-28
• 公開（公告）號: CN111007136A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 陳應龍
• 申請（專利權）人: 杭州育源生命科技有限公司
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30;G01N27/327;G01N21/76;G01N33/74;G01N33/531
• 代理公司: 北京博維知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11486
• 代理人: 張倩

1.一種基于碳量子點的電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將直徑為5mm的玻碳電極(GCE)在鋪有0.5μm的氧化鋁粉末的拋光布上機械打磨拋光，先用二次水洗去表面殘留粉末，再用乙醇清洗，再移入超聲水浴中清洗，氮氣吹干；

在玻碳電極上滴涂10μL濃度為1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室溫下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修飾的玻碳電極；

用PBS沖洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修飾的玻碳電極，滴涂20μLFSH抗體(anti-FSH)在修飾的玻碳電極表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去離子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾的玻碳電極；

在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾的玻碳電極上滴涂30μL濃度為1.0wt.％的BSA，以封閉電極表面上非特異性活性位點，并保存在4℃冰箱中；

取20μL濃度為10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH標準溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾電極表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于AgNPs/CQDs-PEI-GO電化學發光免疫傳感器。

2.根據權利要求1所述的基于碳量子點的電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述AgNPs/CQDs-PEI-GO材料由以下方法制備：

(1)CQDs的制備

稱取100～200g橘子經榨汁機攪拌后得到懸浮液，取30mL橘子汁和40mL乙醇于200mL水熱反應釜中，置于烘箱中200℃加熱6h，反應完全后冷卻至室溫，過濾殘渣，將濾液離心后再用微孔濾膜過濾，再用冷凍干燥機對溶液進行冷凍干燥約72h，得到微黃色粉末，儲存于4℃冰箱中保存備用；

(2)PEI-GO的制備

稱量0.2g GO溶于300mL二次水中，超聲30min；加入0.1g PEI，50℃加熱回流10h，冷卻至室溫，所得產物離心、洗滌，最終溶于水中備用；

(3)AgNPs/CQDs-PEI-GO的制備

取20mL CQDs加入到PEI-GO溶液中，100℃加熱回流2h，所得溶液離心洗滌后，然后加入0.1mL和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亞胺和N-羥基丁二酰亞胺(5:1)的混合溶液，攪拌5min；加入5mL AgNPs后繼續攪10h；得到的產物為AgNPs/CQDs-PEI-GO，離心、洗滌后溶于PBS中。

3.根據權利要求1所述的一種電化學發光免疫傳感器使用方法，所述電化學發光免疫傳感器采用權利要求1所述的制備方法制備，其特征在與，包括如下步驟：

使用電化學工作站用三電極體系，Ag/AgCl做參比電極，鉑絲做對電極，AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH做工作電極，檢測工作在5mL含有0.1mol/L K₂S₂O₈和0.1mol/L KCl的PBS溶液中進行,光電倍增管設置800V，掃描電壓-1.8V～-0.2V，掃速200mV s。

4.一種采用電化學發光免疫傳感器檢測FSH抗體的方法，所述電化學發光免疫傳感器為采用權利要求1所述的電化學發光免疫傳感器，其特征在于，所述檢測方法包括：

FSH抗體的檢測由三部分分析組成：篩選實驗、確證實驗和滴定實驗；

(1)篩選實驗是檢測樣本中是否為FSH抗體潛在陽性，用AgNPs/CQDs-PEI-GO電化學發光免疫傳感器得到FSH抗體的最低檢出限，如濃度大于最低檢出限，需要進一步通過確證實驗驗證；

(2)對不同濃度的anti-FSH標準溶液進行檢測，通過所得的電致化學發光強度與anti-FSH標準溶液濃度之間的關系，繪制工作曲線；

(3)待測樣品溶液代替anti-FSH標準溶液進行檢測，檢測的結果可通過工作曲線查得。