[發(fā)明專利]一種免疫傳感器的制備及用于FSH抗體檢測(cè)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911384380.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111007136A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳應(yīng)龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州育源生命科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N27/48
• 分類號(hào): G01N27/48;G01N27/30;G01N27/327;G01N21/76;G01N33/74;G01N33/531
• 代理公司: 北京博維知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11486
• 代理人: 張倩

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于AgNPs/CQDs?PEI?GO材料，構(gòu)建一種穩(wěn)定性好，靈敏度高的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，以及用于檢測(cè)FSH抗體的方法。AgNPs/CQDs?PEI?GO電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器解決了市面上銷售的抗體檢測(cè)試劑盒無(wú)法用于FSH抗體檢測(cè)的缺陷，為輔助生殖提供了技術(shù)支持，提高了檢測(cè)方法的特異性。本發(fā)所用材料CQDs具有毒性低和生物兼容性好的優(yōu)點(diǎn)，其次，PEI?GO和AgNPs由于其具有高的導(dǎo)電性，大的比表面積和好的生物兼容性等優(yōu)點(diǎn)，因此該傳感器應(yīng)用于樣品的的檢測(cè)中，具有良好的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物傳感檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于AgNPs/CQDs-PEI-GO電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法及用于檢測(cè)FSH抗體的方法。

背景技術(shù)

卵泡刺激素又稱促卵泡激素(Folicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH)，是一種糖蛋白激素，分子量約為30KD，屬于糖蛋白激素家族。它能促進(jìn)顆粒細(xì)胞增生，刺激類固醇生成，調(diào)節(jié)配子細(xì)胞的發(fā)育和成熟，是下丘腦-垂體-性腺軸中的主要激素之一。利用FSH激素誘導(dǎo)卵泡細(xì)胞發(fā)育成熟和體外受精，進(jìn)行完全體外化培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的胚胎，移植給受體，用于完成試管嬰兒等輔助生育。

生殖輔助藥物用于誘導(dǎo)重組促卵泡生長(zhǎng)激素，能夠維持竇前卵泡的存活,并且促進(jìn)原始卵泡的發(fā)展。但藥物長(zhǎng)期使用可能產(chǎn)生抗體，影響效果，目前市場(chǎng)上銷售的用于檢測(cè)抗體的試劑盒無(wú)法有效檢測(cè)到FSH抗體，為了高效地使用生殖藥物，需要及時(shí)檢測(cè)是否產(chǎn)生FSH抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于AgNPs/CQDs-PEI-GO材料，構(gòu)建一種穩(wěn)定性好，靈敏度高的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，以及用于檢測(cè)FSH抗體的方法。

為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種基于碳量子點(diǎn)的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)將直徑為5mm的玻碳電極(GCE)在鋪有0.5μm的氧化鋁粉末的拋光布上機(jī)械打磨拋光，先用二次水洗去表面殘留粉末，再用乙醇清洗，再移入超聲水浴中清洗，氮?dú)獯蹈桑?/p>

(2)在玻碳電極上滴涂10μL濃度為1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室溫下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修飾的玻碳電極；

(3)用PBS沖洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修飾的玻碳電極，滴涂20μLFSH抗體(anti-FSH)在修飾的玻碳電極表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去離子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾的玻碳電極；

(4)在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾的玻碳電極上滴涂30μL濃度為1.0wt.％的BSA，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，并保存在4℃冰箱中；

(5)取20μL濃度為10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修飾電極表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于AgNPs/CQDs-PEI-GO電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。

其中AgNPs/CQDs-PEI-GO材料由以下方法制備：

(1)CQDs的制備

稱取100～200g橘子經(jīng)榨汁機(jī)攪拌后得到懸浮液，取30mL橘子汁和40mL乙醇于200mL水熱反應(yīng)釜中，置于烘箱中200℃加熱6h，反應(yīng)完全后冷卻至室溫，過(guò)濾殘?jiān)瑢V液離心后再用微孔濾膜過(guò)濾，再用冷凍干燥機(jī)對(duì)溶液進(jìn)行冷凍干燥約72h，得到微黃色粉末，儲(chǔ)存于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)PEI-GO的制備