[發明專利]一種IV型膠原蛋白的檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201911384289.0
• 申請日: 2019-12-28
• 公開（公告）號: CN111157740B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 王賢俊;鄭蓓蕾
• 申請（專利權）人: 王賢俊
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 陳加利

本發明公開了一種IV型膠原蛋白的檢測試劑盒及其制備方法，該技術方案以其特點在于，運用組合型偶聯劑，將Ⅳ型膠原蛋白抗體交聯于羧基膠乳微球上，形成Ⅳ型膠原蛋白抗體膠乳顆粒，實現抗體與膠乳微球的高效偶聯。在37℃恒溫，波長為600nm下，測定吸光度，計算出樣品IV型膠原蛋白含量。與傳統偶聯方法相比，本試劑盒抗體利用率高，精密度高，能有效控制批間差，值得進一步推廣使用。

技術領域

本發明涉及醫學檢測及體外診斷領域，具體涉及一種IV型膠原(IVC)的檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

IV型膠原蛋白(IVC)屬于非原纖維膠原蛋白，是基底膜網狀結構的主要成分之一，不但在BMs骨架形成過程中起重要作用，而且還具有參與細胞黏附、遷移、生長、增殖和分化等重要生理過程的功能，因此，IV型膠原蛋白(IVC)的生物學特性與腫瘤、腎病等多種重大疾病密切相關。

作為肝細胞基底膜的核心結構，在肝纖維化形成過程中起主要作用。Ⅳ型膠原蛋白在肝纖維化時有顯著變化，在輕度肝損傷合并肝纖維化內膠原總量增加尚不明顯時，血清Ⅳ型膠原蛋白含量即可明顯增加，其含量的變化能較好的反應肝纖維化、肝細胞損傷及程度。

目前市場上IV型膠原蛋白(IVC)檢測技術常用的方法有如下幾種：酶聯免疫檢測法(ELISA)、放射免疫分析法、時間分辨熒光免疫分析方法、膠乳免疫比濁法、化學發光法等。其中酶聯免疫檢測法(ELISA)需要特定設備，耗時；放射免疫分析技術法需要搭配昂貴的設備，存在放射線輻射和污染等問題；時間分辨熒光免疫分析方法需要用稀有金屬進行標記；化學發光法需要特定設備，且僅能一次發光且易受環境干擾。膠乳免疫比濁法屬于普通免疫比濁技術的衍生技術，克服了普通免疫比濁技術信號量非常有限的缺點，使抗體體積有了數量級上的增長，大幅提升了可檢測性，但該方法也存在技術難點，即抗體與膠乳微球的偶聯效率無法保證，易出現偶聯不上、偶聯速度慢及后期脫落等情況，使得其活性及穩定性不能保證。

大部分的抗體與膠乳微球偶聯所使用的偶聯劑以碳二亞胺(EDC)為主，合成反應活性、偶聯效率、和偶聯的穩定性不能得到保證，因此，找到一種抗體與膠乳微球間高效偶聯的偶聯劑，是本領域亟需解決的技術問題。

發明內容

為解決現有技術存在的問題和不足，本發明的目的是提供一種IV型膠原蛋白的檢測試劑盒，該試劑盒中運用組合型偶聯劑，將Ⅳ型膠原蛋白抗體交聯于羧基膠乳微球上，形成Ⅳ型膠原蛋白抗體膠乳顆粒，實現抗體與膠乳微球的高效偶聯。

為實現上述目的，本發明的技術方案是提供一種IV型膠原蛋白的檢測試劑盒，包括有試劑R1和試劑R2，所述的試劑1與試劑2的體積比為3:1；

所述的試劑R1包括以下組分：

pH6.0-6.5的醋酸鹽緩沖液???????????????50mmol/L

牛血清白蛋白??????????????????????????0.9g/L

疊氮鈉????????????????????????????????0.01％

所述的試劑R2包括以下組分：

所述的Ⅳ型膠原蛋白抗體膠乳顆粒為通過組合型偶聯劑，將Ⅳ型膠原蛋白抗體交聯于羧基膠乳微球上，形成Ⅳ型膠原蛋白抗體膠乳顆粒；

所述的組合型偶聯劑包括有以下組分：

碳二亞胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽三者質量比為1.2﹕1.2﹕1。

另外，本發明還提供一種檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)Ⅳ型膠原蛋白抗體膠乳顆粒的制備，包括以下子步驟