[發(fā)明專利]一種高效體外培養(yǎng)臍血CIK細(xì)胞的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911379927.X
• 申請(qǐng)日: 2019-12-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110938595B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚嘯;譚新民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 譚嘯
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學(xué)俊

1.一種高效體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基組分為：在AlyS505N-0無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加細(xì)胞因子組合物A和中藥提取物B；其中細(xì)胞因子組合物A為濃度為20-200IU/ml 的IL-1α、濃度為500-2000IU/ml的IL-2、濃度為20-100μg/ml的Lymactin-T；中藥提取物B為濃度1-5μg/ml的蟲(chóng)草素、濃度1-5μg/ml的人參皂苷、濃度3-7.5μg/ml的紫杉醇、濃度4-7μg/ml的茯苓多糖、濃度2-6μg/ml的黃芪甲苷和濃度3-5μg/ml的姜醇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞的培養(yǎng)基，其特征在于：所述中藥提取物B為濃度2μg/ml的蟲(chóng)草素、濃度4μg/ml的人參皂苷、濃度4.5μg/ml的紫杉醇、濃度4μg/ml的茯苓多糖、濃度2.5μg/ml的黃芪甲苷和濃度4μg/ml的姜醇。

3.一種利用如權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基高效體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）采集健康臍帶血并分離臍帶血單個(gè)核細(xì)胞，向核細(xì)胞中加入AlyS505N-0基礎(chǔ)培養(yǎng)基，輕輕吹打，重懸混勻，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞接種濃度為1.5×10⁶個(gè)/ml，加入800IU/ml的IFN-γ，置入37℃，6%CO₂飽和濕度下培養(yǎng)；

（2）培養(yǎng)至24小時(shí)，按培養(yǎng)基組分添加細(xì)胞因子組合物A，繼續(xù)置于37℃，6%CO₂飽和濕度下培養(yǎng)；

（3）培養(yǎng)至72小時(shí)，按培養(yǎng)基組分添加含中藥提取物B和300-800IU/ml IL-2的AlyS505N-0基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并繼續(xù)置于37℃，6%CO₂飽和濕度下培養(yǎng)；

（4）之后每隔2-3天，補(bǔ)充添加含300-800IU/ml IL-2的AlyS505N-0基礎(chǔ)培養(yǎng)基，共培養(yǎng)15-17天得到大量的CIK細(xì)胞。