[發明專利]一種豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清及其制備方法

有效

• 申請號: 201911378244.2
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN111018970B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 韓偉;周建民;于雷;宗樹成;潘京學
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發明涉及血清的制備方法，具體涉及一種豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清及其制備方法。所述制備方法以豚鼠或兔作為免疫動物，采用傳代細胞的病毒液作為豬乙型腦炎病毒抗原進行基礎免疫。所制得的乙型腦炎特異性陽性血清效價高達1：2000倍以上，比直接免疫豬所得血清效價高，可滿足乙型腦炎診斷技術和疫苗質量控制的要求。同時，免疫動物為兔和豚鼠，降低了成本，減少了用豬制備陽性血清因同源動物而引起的同源其他外源病毒污染的風險。

技術領域

本發明涉及血清的制備方法，具體涉及一種豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清及其制備方法。

背景技術

豬乙型腦炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)引起的一種經蚊蟲傳播的人畜共患病，是嚴重威脅人畜健康的一種中樞神經系統的急性傳染病。豬是乙腦病毒的重要儲存宿主和擴增宿主，是乙型腦炎的主要傳染源，是引起母豬繁殖障礙的主要病原之一。在乙型腦炎流行季節前，對豬進行預防接種，可有效降低人乙型腦炎發病率。目前，仍沒有特效藥物治療乙型腦炎感染，主要通過預防接種措施來防制。

已發文章和專利文獻上發表的豬乙型腦炎病毒陽性血清的制備是免疫豬或SPF雞，免疫原是原代細胞培養的毒液，尚未有使用豚鼠或兔為免疫動物，傳代細胞培養的毒液為免疫原制備陽性血清的報道。然而，采用現有技術中的方法制得的血清一般效價較低，而且在用豬制備陽性血清時，還可能會因為屬于同源動物而引起同源其他外源病毒的污染。

發明內容

(一)要解決的技術問題

為了提升豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清的效價，滿足乙型腦炎診斷技術和疫苗質量控制的要求，本發明提供了一種豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清及其制備方法。

(二)技術方案

本發明首先提供了一種豬乙型腦炎病毒特異性陽性血清的制備方法，以豚鼠或兔作為免疫動物，在進行基礎免疫時，采用傳代細胞的病毒液作為豬乙型腦炎病毒抗原。

本發明發現，在按上述方案改變免疫動物和免疫原后，可以改善免疫效果，較大地提升陽性血清的效價。

優選地，依次采用所述豬乙型腦炎病毒抗原和豬乙型腦炎病毒活疫苗對所述免疫動物進行基礎免疫，其中，所述豬乙型腦炎病毒活疫苗中含有所述豬乙型腦炎病毒抗原和佐劑；更優選所述豬乙型腦炎病毒抗原的效價≥10^7.0PFU/ml。

進一步優選地，所述基礎免疫的免疫次數為2次，間隔時間為7～10天。優選在進行第1次基礎免疫時，接種豬乙型腦炎病毒抗原；在進行第2次基礎免疫時，接種所述豬乙型腦炎病毒活疫苗。通過這種方式，可以降低免疫動物的副反應，使得免疫原性更持久，血清效價進一步得到提高。

作為優選，所述免疫動物為體重350～450g的豚鼠或體重2000～3000g的兔。

在所述基礎免疫中，所述豬乙型腦炎病毒抗原的具體制備過程如下：將乙型腦炎病毒接種在傳代細胞中后，培養至50～75％細胞出現病變時收獲病毒液；

優選所述傳代細胞為Vero細胞。

按照本領域常識，應當在細胞狀態較好的時候接種病毒，優選在接種時，所述Vero細胞呈致密單層的生長狀態。而細胞的培養條件一般為37℃、5％CO₂。

在所述基礎免疫之后，還包括加強免疫，作為優選方案，所述加強免疫具體包括：

采用豬乙型腦炎病毒滅活疫苗對所述免疫動物進行加強免疫；

優選所述豬乙型腦炎病毒滅活疫苗的制備方法如下：將豬乙型腦炎病毒液滅活后，與佐劑混合制得；其中，所述乙型腦炎病毒液優選為乙型腦炎P3株的病毒液；