[發(fā)明專利]一種豬乙型腦炎病毒特異性陽(yáng)性血清及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911378244.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN111018970B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓偉;周建民;于雷;宗樹成;潘京學(xué)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中牧實(shí)業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種豬乙型腦炎病毒特異性陽(yáng)性血清的制備方法，其特征在于，以豚鼠或兔作為免疫動(dòng)物進(jìn)行制備；

在以豚鼠為免疫動(dòng)物時(shí)，免疫接種具體包括：

(1)基礎(chǔ)免疫：分別對(duì)每只豚鼠腿部肌肉分點(diǎn)注射2ml的豬乙型腦炎病毒抗原，間隔7～10天后，分別對(duì)每只豚鼠腿部肌肉注射2ml豬乙型腦炎病毒活疫苗；

(2)加強(qiáng)免疫：在進(jìn)行所述基礎(chǔ)免疫后，每隔7～10天分別對(duì)每只豚鼠腹腔注射1ml豬乙型腦炎病毒滅活疫苗，共進(jìn)行3～4次；

在以兔為免疫動(dòng)物時(shí)，免疫接種具體包括：

(1)基礎(chǔ)免疫：分別對(duì)每只兔皮下或肌肉注射2ml的豬乙型腦炎病毒抗原，間隔7～10天，分別對(duì)每只兔皮下或肌肉注射2ml豬乙型腦炎病毒活疫苗；

(2)加強(qiáng)免疫：在進(jìn)行所述基礎(chǔ)免疫后，每隔7～10天分別對(duì)每只兔皮下或肌肉注射1ml豬乙型腦炎病毒滅活疫苗，共進(jìn)行3～4次，最后一次免疫接種時(shí)，分別對(duì)每只兔耳源靜脈注射1ml所述豬乙型腦炎病毒滅活疫苗；

其中，所述豬乙型腦炎病毒抗原為傳代細(xì)胞的病毒液，其具體制備過程如下：將乙型腦炎SA14-14-2株接種在Vero細(xì)胞中后，培養(yǎng)至50～75％細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)收獲病毒液，所述豬乙型腦炎病毒抗原的效價(jià)≥10^7.0PFU/ml；

所述豬乙型腦炎病毒活疫苗中含有所述豬乙型腦炎病毒抗原和佐劑；

所述豬乙型腦炎病毒滅活疫苗的制備方法如下：將乙型腦炎P3株的病毒液滅活后，與佐劑混合制得，在滅活前，所述乙型腦炎P3株的病毒液的效價(jià)LD₅₀≥10^-6.52/0.03ml。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述免疫動(dòng)物為體重350～450g的豚鼠或體重2000～3000g的兔。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述滅活的具體過程如下：將β-丙內(nèi)酯與所述乙型腦炎P3株的病毒液按重量比1：(3800～4200)于4℃攪拌滅活22～26小時(shí)，再于37℃水浴條件下水解1.5～2.5小時(shí)，制得乙型腦炎病毒P3株滅活抗原。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述佐劑含有如下重量份組分：

注射用水溶液 90～95份；

聚合物組合：

殼聚糖 1.5～2.5份；

聚乙二醇交酯酸共聚物 1.5～2.5份；

聚乙二醇600 0.8～1.2份；

乳化劑：

烷基糖苷 0.8～1.2份；

助劑：

月桂醇 0.8～1.2份。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述豬乙型腦炎病毒滅活疫苗的制備過程包括：在1800～2200轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌速度下，將所述乙型腦炎病毒P3株滅活抗原緩慢加入滅菌后的所述佐劑中進(jìn)行乳化。

6.一種豬乙型腦炎病毒特異性陽(yáng)性血清，其特征在于，采用權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的制備方法制得。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的豬乙型腦炎病毒特異性陽(yáng)性血清，其特征在于，所述豬乙型腦炎病毒特異性陽(yáng)性血清的效價(jià)在1：2000以上。