[發明專利]一種抗sST2單克隆抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201911376360.0
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN110964106A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 王勇;邱河
• 申請（專利權）人: 蘇州博方生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 廣州哲力智享知識產權代理有限公司 44494
• 代理人: 余全平

1.一種抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

sST2重組蛋白的制備：將sST2基因片段插入pET-28A(+)質粒中，獲得PET-28A-sST2表達載體，然后轉入大腸桿菌中，在含有IPTG的LB液體培養基中22-37℃誘導培養4-6h，提取、純化即得高純度的sST2重組蛋白；所述sST2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示

動物免疫：將45-55μg所述sST2重組蛋白與相同體積的福氏佐劑充分乳化后，于BALB/c小鼠背部皮下多點注射免疫4次，每次免疫時間間隔為14d，篩選體內抗體效價為1：(150000-160000)的小鼠作為免疫小鼠；

雜交瘤細胞的制備：對所述免疫小鼠腹腔注射不加佐劑的sST2重組蛋白95-105μg，提取脾細胞懸浮液與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合，經選擇性培養后，再進行3次亞克隆，即得能穩定分泌特異性抗sST2抗體的雜交瘤細胞；

單克隆抗體的制備：選取8-10周齡的BALB/c小鼠腹腔注射降酯烷，7d后接種所述雜交瘤細胞(0.8-1.2)×10⁶個/只，抽取腹水，經提取、純化后得到抗sST2單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述IPTG在所述LB液體培養基中的終濃度為0.4-0.6mM；所述誘導培養的溫度為37℃，所述誘導培養的時間為6h。

3.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述小鼠骨髓瘤細胞SP2/0與脾細胞懸浮液的體積比為1:5。

4.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述sST2重組蛋白的純化方法為NI-NTA親和層析柱純化。

5.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述免疫小鼠的效價為1:160000。

6.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述選擇性培養采用的培養基為添加胎牛血清、次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶的DMEM培養基。

7.根據權利要求1所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述抗sST2單克隆抗體的純化方法為Protein G親和層析法。

8.一種抗sST2單克隆抗體，其特征在于，由權利要求1-7任一項所述的抗sST2單克隆抗體的制備方法制備而成。

9.根據權利要求8所述的抗sST2單克隆抗體，其特征在于，所述抗sST2單克隆抗體為IgG1亞型。

10.一種如權利要求9所述的抗sST2單克隆抗體在免疫檢測sST2產品中的應用。