[發明專利]一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法和產品及其應用

有效

• 申請號: 201911364980.2
• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN111072752B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 孫培冬;王培宇;楊成
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;C07K7/08;C12P21/06;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 宋華

本發明公開了一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法和產品及其應用，將超濾制得的南瓜籽多肽過葡聚糖凝膠G?10，冷凍干燥得多肽粉；將葡聚糖凝膠G?10分離制備的多肽配制成1～50mg/mL溶液，調節pH至5.0～10.0，依次通過0.45μm及0.22μm的微孔濾膜，得到篩選出的南瓜籽多肽；將溶脹好的DEAE?52陰離子交換樹脂注入層析柱中，去離子水平衡2個柱體積，以1mL/min流速梯度洗脫樣品，洗脫液每管3mL，收集第50～100管洗脫液，冷凍干燥即得具有促進人體皮膚細胞增殖多肽并鑒定出該多肽序列，如SEQ ID NO.1所示。本發明提取制得的多肽化合物可以顯著促進人皮膚成纖維細胞及人永生化角質形成細胞增殖，可以作為修復劑、抗衰老成分添加于護膚品中，具有廣闊的市場前景。

技術領域

本發明屬于生物與新醫藥技術領域，具體涉及到一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法和產品及其應用。

背景技術

細胞是人體中最大的器官，人體衰老一定程度上可以說是細胞衰老。在皮膚衰老過程中，伴隨著角質形成細胞以及成纖維細胞的老化，表皮變薄、劣質化，真皮成膠原蛋白、彈性蛋白減少，皮膚出現皺紋增生以及彈性喪失。因此細胞衰老的重要表現之一為細胞增殖能力的喪失。

南瓜是葫蘆科南瓜屬蔓性草本植物，原產于南美洲，我國種植南瓜范圍廣、資源豐富。南瓜籽仁，含有多糖類、氨基酸、維生素等營養成分和腺嘌呤、葫蘆巴堿等生物堿。

南瓜籽經過處理后，其中的油脂可采用壓榨法、浸出法和超臨界流體萃取等方法進行提取，提油后的南瓜籽粕蛋白質含量可達50％以上，是一種優質的植物蛋白資源。但是目前南瓜籽粕僅用作飼料或者被廢棄，不僅資源浪費，而且造成環境污染。

研究表明，南瓜籽蛋白不僅具有降血糖和抗氧化作用，而且對多種腫瘤細胞具有抑制增殖、誘導凋亡和誘導分化作用。目前，關于南瓜籽多肽及其制備工藝的研究集中在抗氧化性能等方面，關于南瓜籽多肽促進細胞增殖方面的研究沒有報告。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有技術中存在的問題，提出了本發明。

因此，本發明的目的是，克服現有技術中的不足，提供一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，包括，將南瓜籽多肽配制成1～50mg/mL溶液，調節pH至5.0～10.0離心收集上清液，依次通過0.45μm及0.22μm的微孔濾膜，調節超濾壓力為0.1～0.2MPa，常溫超濾1-10次，收集通過1000Da超濾膜的多肽溶液，冷凍干燥得多肽粉；將超濾制得的南瓜籽多肽加入到葡聚糖凝膠G-10中，待樣品完全滲入凝膠后，以超純水作為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，冷凍干燥得多肽粉；將葡聚糖凝膠G-10分離制備的多肽配制成1～50mg/mL溶液，調節pH至5.0～10.0，離心收集上清液，依次通過0.45μm及0.22μm的微孔濾膜，得到篩選出的南瓜籽多肽；將溶脹好的DEAE-52陰離子交換樹脂注入層析柱中，去離子水平衡2個柱體積，加入上述篩選出的南瓜籽多肽，分別用0、0.5、1mol/L NaCl溶液以1mL/min流速梯度洗脫樣品，洗脫液每管3mL，收集第50～100管洗脫液，冷凍干燥即得具有促進人體皮膚細胞增殖多肽。

作為本發明所述具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法一種優選方案，其中：所述冷凍干燥即得具有促進人體皮膚細胞增殖多肽，其中，冷阱溫度-50～-45℃，真空度為0.025MPa，干燥時間為24h。