[發明專利]一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法和產品及其應用

有效

• 申請號: 201911364980.2
• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN111072752B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 孫培冬;王培宇;楊成
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;C07K7/08;C12P21/06;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 宋華

1.一種具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，其特征在于：包括，

將南瓜籽多肽配制成1~50 mg/mL溶液，調節pH至5.0~10.0離心收集上清液，依次通過0.45 μm及0.22 μm的微孔濾膜，調節超濾壓力為0.1~0.2 MPa，常溫超濾1-10次，收集通過1000 Da超濾膜的多肽溶液，冷凍干燥得多肽粉；

將超濾制得的南瓜籽多肽加入到葡聚糖凝膠G-10中，待樣品完全滲入凝膠后，以超純水作為洗脫劑進行洗脫，收集第20~30管的洗脫液，冷凍干燥得多肽粉；其中，洗脫條件為洗脫速度1.0 mL/min，每5 min收集一管洗脫液；

將葡聚糖凝膠G-10分離制備的多肽配制成1~50 mg/mL溶液，調節pH至5.0~10.0，離心收集上清液，依次通過0.45 μm及0.22 μm的微孔濾膜，得到篩選出的南瓜籽多肽；

將溶脹好的DEAE-52陰離子交換樹脂注入層析柱中，去離子水平衡2個柱體積，加入上述篩選出的南瓜籽多肽，分別用0、0.5、1 mol/L NaCl溶液以1 mL/min流速梯度洗脫樣品，洗脫液每管3 mL，收集第50~100管洗脫液，冷凍干燥即得具有促進人體皮膚細胞增殖多肽；其中，

所述南瓜籽多肽，其制備方法為：取脫鹽南瓜籽蛋白以料液比1:5~1:40 g/mL加入至去離子水中，以功率20~60Hz下超聲10~60 min得南瓜籽蛋白分散液，調節溫度至30℃~60、pH至5.0~10.0，以酶底比1%~5.5%加入堿性蛋白酶，酶解2~4 h后滅活，調節反應液溫度至25~50℃、pH7.5，以酶底比1%~5.5%加入胰蛋白酶，酶解2~4 h后滅活，混合液冷卻至室溫，加入1mol/L HCl調節pH至7.0，5000 r/min下離心25 min收集上清液，冷凍干燥得南瓜籽多肽。

2.如權利要求1所述的具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，其特征在于：所述冷凍干燥即得具有促進人體皮膚細胞增殖多肽，其中，冷阱溫度-50~-45℃，真空度為0.025MPa，干燥時間為24 h。

3.如權利要求1所述的具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，其特征在于：所述將南瓜籽多肽配制成1~50 mg/mL溶液，調節pH至5.0~10.0離心收集上清液，其中，離心條件為8000 r/min，時間為10 min。

4.如權利要求1所述的具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，其特征在于：所述脫鹽南瓜籽蛋白，其制備方法，包括，

脫脂南瓜籽以料液比1:10~1:50 g/mL加入至去離子水中，調節pH至7.0~11，25~50℃下超聲提取240 min，其中前120min超聲功率為20Hz，后120min為40Hz，離心收集上清液，調節pH至7.0，5000 r/min下離心25 min收集沉淀，水洗除去鹽，冷凍干燥得脫鹽南瓜籽蛋白。

5.如權利要求4所述的具有促進人體皮膚細胞增殖多肽的制備方法，其特征在于：所述脫脂南瓜籽，其制備方法，包括，

將南瓜籽經高速粉碎機粉碎，過100目篩，按料液比1:2~1:5 g/mL加入石油醚，在25~50℃下攪拌4 h，抽濾，重復三次，將脫脂后于通風櫥中除去殘留石油醚，低溫密封保存。

6.一種如權利要求1~5中任一所述的制備方法制得的多肽，其特征在于：所述多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO .1所示。

7.如權利要求6所述的多肽在化妝品中作為抗衰老、修復、抗氧化成分的應用。