[發明專利]一種諾卡氏菌免疫增強劑在禽用疫苗制備中的應用

在審

• 申請號: 201911362168.6
• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN110935017A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 王文勇;嚴悌昆;張毓金
• 申請（專利權）人: 廣州科力生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P37/04;A61P31/12
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種諾卡氏菌免疫增強劑在禽用疫苗制備中的應用。所述免疫佐劑是利用諾卡氏菌經發酵罐培養，高壓滅菌后進行提取而制得的。本發明通過將諾卡氏菌的培養物或者發酵物作為免疫佐劑，用于制備禽用疫苗，具有安全性高，疫苗注射無殘留，可以顯著提高動物的免疫力。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種諾卡氏菌免疫增強劑在禽用疫苗制備中的應用。

背景技術

免疫增強劑是指單獨或同時與抗原使用均能增強機體免疫應答的物質，目前佐劑的品種較多，按其作用的先決條件可分為三類：⑴免疫替代劑，用來代替某些具有免疫增強作用的生物因子的藥物；⑵免疫恢復劑，能增強被抑制的免疫功能，但對正常免疫功能作用不大；⑶免疫佐劑，又稱非特異性刺激劑。常用的免疫增強劑有卡介苗、短小棒狀桿菌、內毒素、免疫核糖核酸、胸腺肽、轉移因子、雙鏈聚核苷酸、氫氧化鋁鋁膠佐劑等。

上述佐劑中，有的雖然已經研究應用于人類如胸腺素，但價格較為昂貴，不可能用于動物。目前動物疫苗所用佐劑如氫氧化鋁鋁膠佐劑，通過延長疫苗在注射部位的停留時間發揮佐劑效應，還沒有直接通過增強動物機體自身的免疫應答能力的佐劑來提高免疫效果，致使動物免疫效果較差，影響了畜禽養殖業的快速健康發展。因此，研發新型的免疫增強劑，改善動物免疫效果，成為畜禽養殖業亟待解決的問題之一。

諾卡氏菌是具有較強免疫活性的微生物，其主要結構中的諾卡式霉菌酸，可非特異性刺激細胞免疫功能，并且促進多種細胞因子分泌，其添加到禽用油乳劑滅活疫苗中可以明顯促進疫苗誘導動物抗體的產生，并且抗體水平在球蟲陽性場無明顯下降。

中國專利申請CN108815198A公開了一種紅色諾卡氏菌細胞壁骨架作為巨噬細胞增殖促進劑的用途，所述紅色諾卡氏菌為Nr-8206，在體外可以用于促進巨噬細胞增殖、促進巨噬細胞表面功能分子MHC-II、CD86、CD80或TLR4的表達、促進巨噬細胞胞內活性氧的產生、促進巨噬細胞TNF-α、IL-6、IL-12p40、IL-1β或IFN-β的表達、抑制巨噬細胞IL-10的表達、以及促進巨噬細胞殺傷卵巢癌細胞。但是，這種促進作用是針對特定的巨噬細胞，適用范圍窄，且可選擇的菌種范圍也窄，且對動物的免疫效果無明顯促進作用。

綜上可知，現有技術中的免疫增強劑普遍存在免疫效果差，適用范圍窄，促進作用不明顯等缺點。

發明內容

為了克服現有技術中存在的不足，本發明的目的在于提供一種諾卡氏菌免疫增強劑在禽用疫苗制備中的應用。本發明提供的免疫佐劑是以諾卡氏菌為佐劑，制備成禽用油乳劑滅活疫苗，通過選擇的抗原不同，制成的疫苗也不同。本發明提供的由免疫佐劑制成的疫苗免疫性強，制備過程簡單，且根據選擇的抗原不同，制成的滅活疫苗也不同，適用范圍廣，相對應的疫苗特異性強。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種諾卡氏菌免疫增強劑，利用諾卡氏菌制備，制備方法如下：

將諾卡氏菌置于30L的發酵罐中培養48小時，高溫高壓滅活，即得；

發酵罐中培養基的配方為葡萄糖2％、酵母粉1％、胰蛋白胨2％、純化水95％，pH7.0-7.2；

在發酵罐中的培養條件為：攪拌轉速310r/min，通氣量1:1.0、接種量8％、裝液量為罐容積的65％、溫度30℃。

優選地，所述高溫高壓滅活的具體操作為121℃，101kPa，處理20min。

本發明還提供了一種所述諾卡氏菌免疫增強劑在制備禽用油乳劑滅活疫苗中的應用。

本發明還提供了一種所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

S1、將諾卡氏菌佐劑進行定量，同時測定其類脂化合物、阿拉伯半乳糖及粘肽的含量，得定量的諾卡氏菌佐劑；