[發(fā)明專利]一種諾卡氏菌免疫增強(qiáng)劑在禽用疫苗制備中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911362168.6
• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN110935017A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王文勇;嚴(yán)悌昆;張毓金
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州科力生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P37/04;A61P31/12
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種諾卡氏菌免疫增強(qiáng)劑，利用諾卡氏菌制備，其特征在于，制備方法如下：

將諾卡氏菌置于30L的發(fā)酵罐中培養(yǎng)48小時，高溫高壓滅活，即得；

發(fā)酵罐中培養(yǎng)基的配方為葡萄糖2％、酵母粉1％、胰蛋白胨2％、純化水95％，pH7.0-7.2；

在發(fā)酵罐中的培養(yǎng)條件為：攪拌轉(zhuǎn)速310r/min，通氣量1:1.0、接種量8％、裝液量為罐容積的65％、溫度30℃。

2.如權(quán)利要求1所述的諾卡氏菌免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述高溫高壓滅活的具體操作為121℃，101kPa，處理20min。

3.一種如權(quán)利要求1所述的諾卡氏菌免疫增強(qiáng)劑在制備禽用油乳劑滅活疫苗中的應(yīng)用。

4.一種如權(quán)利要求3應(yīng)用中所述的禽用油乳劑滅活疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將諾卡氏菌佐劑進(jìn)行定量，同時測定其類脂化合物、阿拉伯半乳糖及粘肽的含量，得定量的諾卡氏菌佐劑；

S2將步驟S1所得定量的諾卡氏菌佐劑按乳化配方添加至混合抗原水相中，攪拌均勻并進(jìn)行常規(guī)乳化，得初始的禽用油乳劑滅活疫苗；

S3、將步驟S2所得初始的禽用油乳劑滅活疫苗經(jīng)物理性狀檢測，安全性檢測、效力試驗檢測及商品動物免疫檢測，驗證合格后，即得。

5.如權(quán)利要求4所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備過程，其特征在于，所述步驟S1中諾卡氏菌佐劑的定量過程為：無菌移取2mL佐劑樣本平分到2支1.5mL eppendorf管中，12000rpm/min高速離心5min，棄除上清液后，置于103℃干燥箱中充分干燥2小時，測定樣本干物質(zhì)重量。

6.如權(quán)利要求4所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備過程，其特征在于，所述步驟S1中測得類脂化合物含量為17.3％、多糖含量47.2％，粘肽含量為35.5％。

7.如權(quán)利要求4所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備過程，其特征在于，所述步驟S2的具體操作為：取適當(dāng)量諾卡氏菌佐劑5mg添加入100mL抗原液中，加入5ml的TWEEN-80后混勻，制備成抗原水相；按照抗原水相：油相＝1:2比例，使用IKA T25乳化機(jī)，12000rpm高速乳化5min。

8.如權(quán)利要求4所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備過程，其特征在于，所述步驟S2中的抗原包括禽流感H9亞型、新城疫、雞傳染性法氏囊、禽腺病毒、鴨疫李默氏桿菌、新型鴨呼腸孤。

9.如權(quán)利要求4所述禽用油乳劑滅活疫苗的制備過程，其特征在于，所述步驟S3中商品動物免疫檢測是采用市購的商品雞、鴨和鵝進(jìn)行動物實(shí)驗，模擬臨床進(jìn)行疫苗效果評估。