[發明專利]一種大熊貓犬瘟熱病毒的異源抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201911354898.1
• 申請日: 2019-12-25
• 公開（公告）號: CN110950950B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 趙玄多;張躍;武英利;楊維維;李麗;張玉新;張子佳;劉靜;史明;朱明媛;王溪;黃韜;王曉輝;谷孝玉;李潤;梁先紅
• 申請（專利權）人: 唐山怡安生物工程有限公司;楊凌博德越生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/06;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 方挺;黃謙

本發明涉及一種針對大熊貓的犬瘟熱病毒的異源抗體，尤其是馬源抗體，旨在能夠作為異源抗體用于大熊貓犬瘟熱的治療和預防。所述馬源抗體來源于健康、不曾患過任何傳染性疾病的馬匹，優選1歲齡左右的幼齡馬匹。同時，本發明涉及一種犬瘟熱病毒的馬源抗體的制備方法，該方法通過利用來源、背景清楚的大熊貓犬瘟熱病毒強毒株制備免疫用滅活疫苗，使用該滅活疫苗多次免疫健康馬匹獲得馬的免疫血清，進一步通過鹽析、酶切、層析等純化方法，獲得純化抗體，用于大熊貓犬瘟熱的預防和治療。

【技術領域】

本發明涉及抗體及其抗體的制備方法，進一步涉及犬瘟熱病毒的異源抗體及其制備方法。

【背景技術】

犬瘟熱(Canine distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus，CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，有較高發病率和病死率,臨床上以厭食、雙相熱、結膜炎、嚴重的胃腸炎和神經癥狀為典型特征。隨著犬瘟熱感染宿主范圍的日益擴大，從1983年開始，享有“活化石”之稱的我國國寶大熊貓也相繼有感染犬瘟熱死亡的報道。1997年，胡貴學等報道犬瘟熱病毒感染大熊貓且引起死亡。2014年12月-2015年5月樓觀臺陜西秦嶺大熊貓繁育基地相繼有5只大熊貓因感染犬瘟熱病毒死亡，造成重大經濟損失和不良影響。因此，動物專家認為犬瘟熱是威脅大熊貓生命安全的第一大烈性傳染病。

目前，國內外尚無專門針對大熊貓犬瘟熱的有效疫苗、預防或治療性藥物，國內外用于免疫預防大熊貓犬瘟熱的疫苗主要有：弱毒疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗及基因重組疫苗，然而國內外大熊貓繁育機構對犬瘟熱疫苗的使用非常謹慎，既擔心滅活苗無法產生有效的抗體，又擔心弱毒疫苗誘發大熊貓犬瘟熱的發生，另外，Harder等報道CDV野生型分離物與疫苗株有明顯差異。因此，通過疫苗接種來預防大熊貓犬瘟熱的發生目前存在著較大的風險，大熊貓繁育機構對于疫苗接種的方式預防犬瘟熱持謹慎態度。

抗體治療是調動機體免疫系統的另一種方式，有研究表明，犬瘟熱抗體在感染初期對患畜有較好的治療效果，但鑒于大熊貓的珍稀性，大熊貓源的犬瘟熱抗體不易獲得，制備異源抗體則成為必然。然而我國抗體產業在表達水平、生產規模和純化能力等方面滯后，市售犬瘟熱單克隆抗體和異源多克隆抗體純化水平低，異源蛋白的排斥作用極易引起嚴重的過敏反應，無法用于大熊貓等珍稀動物的疾病治療。因此，研制一種安全、有效的可用于大熊貓犬瘟熱的精制異源抗體是十分必要的。

我們在多種動物篩選后意外的發現犬瘟熱病毒的馬源抗體其安全性呈現出出乎意料的效果，因此成就了本發明。

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種針對犬瘟熱病毒的馬源抗體，旨在能夠作為異源抗體用于大熊貓犬瘟熱的治療和預防。

進一步本發明提供的馬源抗體來源于健康、不曾患過任何傳染性疾病或注射過任何疫苗和藥物的馬匹，優選1歲齡左右的幼齡馬匹。

進一步，本發明通過大熊貓犬瘟熱病毒強毒株制備的免疫用滅活疫苗來免疫馬匹獲得馬源抗體。

同時，本發明提供一種犬瘟熱病毒的馬源抗體制備方法，該方法通過利用來源、背景清楚的大熊貓犬瘟熱病毒強毒株制備免疫用滅活疫苗，使用該滅活疫苗多次免疫健康馬匹獲得馬的免疫血清，進一步通過鹽析、酶切、層析等純化方法，獲得純化抗體，用于大熊貓犬瘟熱的預防和治療。

進一步所述制備方法具體包括以下步驟：

(1)對大熊貓犬瘟熱病毒強毒株進行擴增、滅活制備犬瘟熱滅活疫苗原液。

(2)按佐劑：犬瘟熱滅活疫苗原液＝1:3-5的比例加入帕米卡佐劑，制備獲得免疫原。

(3)對健康馬匹在背部皮下分點注射進行免疫，獲得犬瘟熱高免疫血清。

(4)對所述血清抗體進行純化處理，獲得馬源抗體。