[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911354423.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110982788B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李力燕;馬微;郭建輝;楊金偉;王先斌;劉礦嬪;劉潔;劉偉;臧成昊;吳朕;梁宇;李春艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昆明醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/0793
• 分類號(hào): C12N5/0793
• 代理公司: 昆明普發(fā)諾拉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 53209
• 代理人: 蔣晗

本發(fā)明公開(kāi)了一種誘導(dǎo)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的方法，所述方法操作如下：取傳代培養(yǎng)后的衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞在含有Anti?proBDNF的誘導(dǎo)培養(yǎng)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)3～7天后得到神經(jīng)元。本發(fā)明在生理?xiàng)l件下(未進(jìn)行外源性基因轉(zhuǎn)染)，抑制內(nèi)源性proBDNF能夠誘導(dǎo)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)元表型的分化。本發(fā)明為周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的發(fā)生提供了一種新的理論支持，發(fā)現(xiàn)周?chē)窠?jīng)發(fā)生的一種新的方式??由神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞直接轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元。為外周神經(jīng)發(fā)育及損傷修復(fù)治療研究提供了新的理論依據(jù)，而且本發(fā)明方法操作更簡(jiǎn)便，轉(zhuǎn)分化率較高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞轉(zhuǎn)分化領(lǐng)域，尤其涉及一種誘導(dǎo)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的方法。

背景技術(shù)

神經(jīng)系統(tǒng)(nervous system，NS)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS) 和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)(peripheral nervous system，PNS)，是機(jī)體內(nèi)對(duì)生理功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)起主導(dǎo)作用的系統(tǒng)是機(jī)體最重要的系統(tǒng)。神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)、功能復(fù)雜，依舊存在很多未解之謎。因此，神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、損傷以及修復(fù)一直是醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)細(xì)胞的損傷、凋亡后的修復(fù)主要是通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells，NSCs)的誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞，從而替代損傷部位的神經(jīng)細(xì)胞。成年哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在神經(jīng)發(fā)生的現(xiàn)象，其結(jié)果和重要性已是一個(gè)公認(rèn)的醫(yī)學(xué)研究觀點(diǎn)，神經(jīng)發(fā)生現(xiàn)象在大腦可塑性、學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能和損傷修復(fù)中起著關(guān)鍵性的作用。那么，在外周神經(jīng)系統(tǒng)是否也存在同中樞神經(jīng)系統(tǒng)類似的神經(jīng)發(fā)生現(xiàn)象？研究發(fā)現(xiàn)外周神經(jīng)系統(tǒng)也存在神經(jīng)發(fā)生或神經(jīng)元數(shù)量增多現(xiàn)象，但卻較少被認(rèn)識(shí)到。

背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)位于兩節(jié)椎骨之間的椎孔內(nèi)，屬于周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)，是外周傳入神經(jīng)和傳出神經(jīng)的中轉(zhuǎn)站，為初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元的聚集處，是軀體感覺(jué)的初級(jí)傳入神經(jīng)元。外周神經(jīng)疾病或者損傷可導(dǎo)致背根節(jié)神經(jīng)元減少、神經(jīng)元之間的連接出現(xiàn)紊亂、創(chuàng)傷性神經(jīng)瘤的形成等，造成感覺(jué)傳導(dǎo)異常，引起神經(jīng)病理性疼痛。神經(jīng)病理性疼痛是神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的一種難以治愈的慢性痛狀態(tài)。損傷發(fā)生后不僅引起神經(jīng)病理性疼痛，同時(shí)還存在神經(jīng)修復(fù)作用、神經(jīng)再生的過(guò)程，提示神經(jīng)病理性疼痛與神經(jīng)修復(fù)再生之間存在某種聯(lián)系，所以在探索神經(jīng)損傷新的治療方法的同時(shí)也必須考慮到對(duì)神經(jīng)修復(fù)和再生的影響。

衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞(Satellite Glial Cells，SGCs)是背根神經(jīng)節(jié)中圍繞在感覺(jué)神經(jīng)元周?chē)囊蝗杭?xì)胞，具有同中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用，是外周神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，廣泛分布在背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia，DRG)和三叉神經(jīng)節(jié)(trigeminal ganglia，TG)中，對(duì)神經(jīng)元起支持、保護(hù)、營(yíng)養(yǎng)等作用。最初人們認(rèn)為衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞僅僅為神經(jīng)元提供結(jié)構(gòu)支撐、營(yíng)養(yǎng)支持，從而促進(jìn)神經(jīng)元的生長(zhǎng)發(fā)育。

proBDNF(precursor for brain-derived neurotrophic factor)是成熟腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的前體形式，裂解后形成成熟BDNF。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體不僅可以作為腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的前體形式，它也可以由神經(jīng)細(xì)胞突觸分泌到細(xì)胞外區(qū)域，與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子起著不同的作用。proBDNF與神經(jīng)損傷后神經(jīng)元的死亡及神經(jīng)退行性變等神經(jīng)系統(tǒng)疾病都有關(guān)，其作用方式和傳導(dǎo)通路與成熟的BDNF也不盡相同。

目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元。本發(fā)明在前期成功建立一種穩(wěn)定的、高效的、高純度的DRG-SGCs體外原代培養(yǎng)模型后，又研究了衛(wèi)星膠質(zhì)量細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化過(guò)程，并且成功獲得了神經(jīng)元。

發(fā)明內(nèi)容