[發明專利]一種厄貝沙坦中NMBA含量的測定分析方法

在審

• 申請號: 201911353061.5
• 申請日: 2019-12-25
• 公開（公告）號: CN113030352A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 陳敏佳;邱學艷;顧虹;安建國;胡素招;楊梅;嚴雯
• 申請（專利權）人: 上海奧博生物醫藥技術有限公司;浙江華海藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
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本發明公開了一種厄貝沙坦中5?(甲基(亞硝基)氨基)?戊酸(以下簡稱NMBA)含量的測定分析方法，該方法直接用高效液相色譜?質譜聯用儀測定厄貝沙坦中NMBA的含量。該分析方法與現有技術相比具有專一性好,重現性好，靈敏度極高，適合做痕量分析等特點。

技術領域

本發明涉及用高效液相色譜-質譜聯用儀直接測定出厄貝沙坦中5-(甲基(亞硝基)氨基)-戊酸(以下簡稱NMBA)的含量。此方法能較好的控制厄貝沙坦痕量NMBA含量，為患者的健康安全用藥提供保障，屬于醫藥技術領域。

技術背景

厄貝沙坦，化學名2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]芐基]-1，3-二氮雜螺-[4,4]壬-1-烯-4-酮。

厄貝沙坦是一種治療原發性高血壓，合并高血壓的2型糖尿病腎病的藥物。在厄貝沙坦工藝中，殘留溶劑N-甲基吡咯烷酮(以下簡稱NMP)與亞硝酸鹽可能形成雜質NMBA。根據ICH M7指導原則，NMBA歸為第一類基因毒性物質，TD50＝0.982mg/kg/day。轉換成PDE為0.98μg/day，基于厄貝沙坦的日劑量300mg/day，計算出NMBA限度值為3.2ppm。然而，根據美國FDA的最新要求，厄貝沙坦中NMBA雜質含量被特定地降低10倍至0.32ppm。NMBA結構如下：

準確定量地測定厄貝沙坦中痕量的NMBA含量極具挑戰性。很難采用氣相、液相色譜等對其進行痕量直接測定。

目前，測定厄貝沙坦中NMBA含量的方法只有采用經典的色譜法,其專一性、靈敏度、方法精密度和重復性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析結果。為了克服原方法的缺陷，本發明采用高效液相色譜-質譜聯用儀直接測定厄貝沙坦中NMBA的含量。該分析方法具有操作簡單、專一性好、靈敏極高、重現性好等特點。

發明內容

如上所述，直接準確定量測定痕量NMBA存在各種缺陷。最直接提高靈敏度的手段為增大進樣體積和/或增加API濃度。但是，厄貝沙坦僅能溶解在非極性溶劑中，而NMBA極性大，在反相柱上保留必須用高比例水相流動相，因為稀釋劑和流動相存在較大的極性差異，增大進樣體積易造成了顯著的“強溶劑效應”使峰展寬裂分，反而降低了靈敏度。另外，己有方法中厄貝沙坦的濃度已接近上限，無再增加的空間。為了在原HPLC-MS方法基礎上，增加對NMBA的檢測靈敏度，我們利用厄貝沙坦高脂溶性，以及NMBA在堿性水溶液中高溶解性的理化特征，增加了樣品預處理技術環節。先將厄貝沙坦以較高的濃度溶解于非極性溶劑，例如乙酸乙酯，二氯甲烷等，再用較少量的堿性水溶液將NMBA以羧酸負離子狀態萃取至水相，該過程中，在水相中能高效地富集厄貝沙坦中的NMBA，而水相中幾乎不含厄貝沙坦。另外，由于樣品稀釋劑為純水相，與高比例水相流動相不會產生“強溶劑效應”，還可以增大進樣體積而不會發生峰展寬與裂分現象。樣品富集預處理結合增大進樣量可極大的提高了方法的靈敏性。

通過試驗發現厄貝沙坦在乙酸乙酯，二氯甲烷等非極性溶劑中有非常好的溶解性。本發明將用乙酸乙酯，二氯甲烷等非極性溶劑作為樣品的稀釋劑。

本發明涉及一種厄貝沙坦中NMBA含量的測定分析方法，該方法為直接用高效液相色譜-質譜聯用儀測定厄貝沙坦中NMBA的含量。

上述樣品配制中用乙酸乙酯，二氯甲烷等非極性溶劑將樣品溶解，選用碳酸氫鈉溶液萃取。

上述采用高效液相色譜-質譜聯用儀，正離子選擇離子模式。

該方法包括以下幾個步驟：

(1)取厄貝沙坦粉末或制劑粉末，以乙酸乙酯，二氯甲烷等非極性溶劑作為稀釋液溶解樣品，加入碳酸氫鈉萃取。

(2)采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為0.02％-0.5％七氟丁酸水溶液和乙腈，進行梯度洗脫。