[發明專利]一種評估抗結核藥物治療所致肝損傷風險的診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201911350221.0
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN110964804A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 秦勝營;懷聰;賀林
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 陳少凌;郭國中

本發明公開了一種評估抗結核藥物治療所致肝損傷風險的診斷試劑盒；所述試劑盒應用與抗結核藥物治療所致肝損傷風險相關的DNA甲基化生物標志物進行抗結核治療肝損傷風險預測；所述標志物為位于NCX2基因上的CpG位點的甲基化水平，該CpG位點絕對位置為chr19:47447537?47447538(GRCh38)。本發明提供了一種針對chr19:4744753?47447538CpG位點DNA甲基化水平進行檢測的核酸引物、檢測方法及試劑盒；本發明提供的試劑盒能夠有效評估抗結核藥物治療所致肝損傷的發病風險，促進抗結核精準用藥的實現。

技術領域

本發明屬于基因技術領域，涉及一種評估抗結核藥物治療所致肝損傷風險的診斷試劑盒；更具體涉及一種針對chr19:47447537-47447538(GRCh38)CpG位點DNA甲基化水平進行檢測的核酸引物、檢測方法及試劑盒。

背景技術

結核是一種由結核分枝桿菌引起的慢性傳染病，主要感染肺部。抗結核治療的一線治療方案為異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇的聯合用藥，也是肺結核初治的標準化學治療方案，可以對快速繁殖和半靜止的結核桿菌進行同時殺傷，避免耐藥性的產生。然而，抗結核藥物治療方案在人群中會引發不同程度的不良反應，涉及肝、腎、皮膚、胃腸道、血液、神經等多個組織器官。肝損傷是抗結核藥物引發的最為常見、最嚴重的不良反應，我國抗結核治療者中約15％～30％發生可逆性中度轉氨酶升高，約2.55％～11.9％發生包括肝壞死在內的嚴重肝損傷，全球各國家地區報道的嚴重肝損傷發生率也在0.8％～40％不等。抗結核藥物引起肝損傷的死亡率高達22.7％，在出現黃疸、腹水或肝性腦病時死亡率更高。此外，抗結核藥物所致肝損傷引起的抗結核治療中斷或失敗，也是誘發耐多藥結核的重要原因之一。

藥物性肝損傷是在按規定劑量正常應用藥品的過程中產生的有害而非所期望的、與藥品應用存在因果關系的肝臟不良反應，主要表現為肝細胞壞死、肝內膽汁淤積或上述二者的混合癥狀。根據生化檢測指標，一般認為當血液中谷丙轉氨酶超過5倍正常值上限，或堿性磷酸酶超過3倍正常值上限，或谷丙轉氨酶超過3倍正常值上限且總膽紅素超過2倍正常值上限時，診斷為發生嚴重藥物肝損傷。但血液指標往往為肝損傷發生后的指示，并不能作為早期風險預測指標。

研究表明，抗結核藥物治療所致嚴重肝損傷有明顯的個體差異，受到遺傳因素的影響。同時，DNA甲基化可以影響60余種藥物代謝酶的表達水平，但尚未有明確的DNA甲基化標志物可以對藥物引起的肝損傷進行預測，因此開發更多的與抗結核治療所致藥物肝損傷分子標記物及風險預測試劑盒對患者實現個體化治療是非常有必要的。

NCX2基因位于人類第19號染色體q13.32區段，編碼Na⁺-Ca²⁺離子交換器，主要介導鈣離子與鈉離子在細胞膜上的電交換，從而有助于調節胞質鈣離子水平和鈣依賴性細胞過程，維持興奮性細胞內Ca²⁺離子穩態，并有助于神經元激活后胞漿Ca²⁺水平迅速降低至基線水平，從而有助于調節突觸可塑性、學習和記憶。在調節尿鈣和尿鈉排泄中起作用。對現有文獻的檢索，未發現有本發明的NCX2基因chr19:47447537-47447538CpG甲基化為抗結核治療所致藥物性肝損傷的分子標記物的相關報道。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明在NCX2基因chr19:47447537-47447538CpG的甲基化水平可以作為抗結核治療所致藥物性肝損傷風險預測的分子標記物的基礎上，提供了一種評估抗結核藥物治療所致肝損傷風險的診斷試劑盒；更具體是提供一種分離待測位置核酸的核酸引物、檢測方法、及其應用評估抗結核藥物治療所致肝損傷的發病風險的試劑盒。本發明提供的試劑盒能夠有效評估抗結核藥物治療所致肝損傷的發病風險，促進抗結核精準用藥的實現。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：