[發明專利]一種評估抗結核藥物治療所致肝損傷風險的診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201911350221.0
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN110964804A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 秦勝營;懷聰;賀林
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 陳少凌;郭國中

1.一種與抗結核藥物治療所致肝損傷風險相關的分子標志物，其特征在于，所述標志物為位于NCX2基因上的CpG位點的甲基化水平，該CpG位點絕對位置為chr19:47447537-47447538(GRCh38)。

2.一種如權利要求1所述的分子標志物在制備檢測抗結核治療所致藥物性肝損傷風險的試劑盒中的用途。

3.一種擴增分離的含如權利要求1所述的分子標志物中的CpG位點的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述CpG位點位于SEQ ID NO:1所示序列的第24356-24357位。

4.一種如權利要求3所述的核苷酸在制備檢測抗結核治療所致藥物性肝損傷風險的試劑盒中的用途。

5.一種針對chr19:47447537-47447538(GRCh38)CpG位點DNA甲基化水平進行檢測的引物對，其特征在于，所述引物對：SEQ ID No:2、SEQ ID No:3所示。

6.一種檢測抗結核治療所致藥物性肝損傷風險的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：根據如SEQ ID NO：1所示序列的第24356-24357位的上下游設計的引物對。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述引物對的序列如SEQ ID No:2、SEQ IDNo:3所示。

8.一種如權利要求6或7所述的試劑盒的非診斷目的使用方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

步驟一，提取樣品DNA；

步驟二，將DNA進行亞硫酸氫鹽處理和純化；

步驟三，利用所述引物進行擴增，得擴增產物；

步驟四，檢測所述擴增產物中chr19:47447537-47447538CpG位點的甲基化水平；甲基化水平在4％以下的認定為抗結核治療所致藥物性肝損傷風險高。

9.如權利要求8所述的使用方法，其特征是，步驟四中，所述檢測的方法包括MassARRAY飛行質譜檢測、焦磷酸測序、高分辨率溶解曲線分析技術、甲基化特異性PCR技術或變性高效液相色譜法。

10.如權利要求8所述的使用方法，其特征是，步驟三中，所述擴增的具體條件如下：反應體系為10μL，其中含有：

50mM KCl，10mM Tris-HCl(pH8.3)，2mM MgCl₂，200μM dNTPs，0.4U Taq DNA聚合酶，0.4μM SEQ ID No:2引物，0.4μM SEQ ID No:3引物，20-25ng經過亞硫酸氫鹽處理的模板DNA，雙蒸水補足至10μL；

PCR反應程序為：95℃ 4min；45×(95℃ 20s；56℃ 30s，72℃ 1min)72℃ 3min。