[發明專利]一種皮膚紫外損傷細胞模型、建立方法及應用

在審

• 申請號: 201911347727.6
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN111088247A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 黃九九;劉偉;何俊湘;蔡雪妍;廖思藝;林瑞松
• 申請（專利權）人: 華南農業大學;廣州美斛健生物技術有限公司;廣州市博藤貿易有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 張煥響

本發明公開了一種皮膚紫外損傷細胞模型、建立方法及應用，屬于細胞模型建立技術領域，所述皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法包括：(1)表皮細胞的培養；(2)紫外輻照損傷表皮細胞：紫外輻照對數生長期的表皮細胞；(3)細胞檢測。所述應用為皮膚紫外損傷細胞模型在鑒定皮膚紫外損傷修復效果中的應用。本方法所建立的皮膚紫外損傷細胞模型，不需要實驗動物參與，建模成本低，對于皮膚紫外損傷應激反應更加靈敏，能夠在分子生物學水平上探討皮膚紫外損傷，能夠為模擬皮膚紫外實驗的進行以及修復皮膚紫外藥物的篩選和驗證提供條件。

技術領域

本發明涉及細胞模型建立技術領域，特別是涉及一種皮膚紫外損傷細胞模型、建立方法及應用。

背景技術

人體皮膚受到紫外線的照射，會引起皺紋、彈性下降、松弛、DNA損傷甚至產生黑色素瘤的問題，特別是膚色較淺的人，紫外線對其傷害更為嚴重。其中，中波紫外線UVB生物學效應最高，是引起皮膚損傷的重要波段。正常生長情況下，皮膚細胞的生成與死亡保持平衡狀態，當其受到UVB紫外輻照干擾，細胞自身不能修復損傷，引起細胞凋亡，導致曬斑、光老化，甚至皮膚癌的發生。研究表明人臉部衰老80％是由于太陽輻射，表現為皮膚粗糙、失去彈性、色素沉積、產生褶皺等。

人永生化表皮角質細胞(HaCaT細胞)是非腫瘤來源的人正常皮膚永生化角質形成的細胞，和正常人細胞的生理特點與增殖分化特征十分相似，具有培養條件簡單、易于增殖、并能大規模培養的優點。因此，本發明采用HaCaT細胞建立損傷模型模擬皮膚受UVB輻照的損傷過程。

目前國內外尚無以HaCaT細胞為對象建立的用以鑒定皮膚紫外損傷修復效果的細胞模型專利。因此，需要一種方便、精準的篩選或驗證治療皮膚紫外損傷的藥物試劑的方法，并且必須建立在分子生物學水平上探討皮膚紫外損傷，才能為模擬紫外線實驗的進行以及修復紫外線損傷藥物、化妝品原料的篩選和驗證提供條件。

發明內容

本發明的目的是確立紫外損傷表皮細胞的技術參數，提供一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，以解決上述現有技術存在的問題，能夠快速模擬皮膚細胞紫外損傷環境，反映紫外損傷后細胞的狀態。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供了一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，包括以下步驟：

(1)表皮細胞的培養；

(2)紫外輻照損傷表皮細胞：紫外照射處理對數生長期的表皮細胞，得到紫外輻照損傷表皮細胞；

(3)細胞檢測：將步驟(2)中的紫外輻照損傷表皮細胞按不同的輻照時間進行培養，培養完成后取出細胞培養皿，檢測表皮細胞紫外輻照損傷指標，測定細胞的相對存活率。

作為本發明的進一步改進，所述表皮細胞為人永生化表皮角質細胞，即HaCaT細胞。

作為本發明的進一步改進，HaCaT細胞的培養過程為：取凍存的HaCaT細胞，放置于37℃水浴鍋解凍，隨后轉移至裝有完全培養基的離心管中，離心、沉淀重懸后轉移至細胞培養皿中，置于37℃，5％CO₂的二氧化碳培養箱培養。

作為本發明的進一步改進，所述完全培養基的成分為含10％胎牛血清的DMEM完全培養基。

作為本發明的進一步改進，步驟(2)所述紫外輻照損傷HaCaT細胞的過程為：取對數生長期的HaCaT細胞進行消化、離心、計數，將細胞調整濃度為1×10⁵個/mL，取100μL/孔接種于96孔板，二氧化碳培養箱培養24h后，吸去培養液，每孔加入預熱的PBS緩沖液50μL覆蓋細胞，150mJ/cm²紫外輻照細胞。

作為本發明的進一步改進，使用血球計數板計數。

本發明的目的之二是提供一種由所述的皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法建立得到皮膚紫外損傷細胞模型。