[發明專利]一種皮膚紫外損傷細胞模型、建立方法及應用

在審

• 申請號: 201911347727.6
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN111088247A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 黃九九;劉偉;何俊湘;蔡雪妍;廖思藝;林瑞松
• 申請（專利權）人: 華南農業大學;廣州美斛健生物技術有限公司;廣州市博藤貿易有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 張煥響

1.一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)表皮細胞的培養；

(2)紫外輻照損傷表皮細胞：紫外輻照對數生長期的表皮細胞，得到紫外輻照損傷表皮細胞；

(3)細胞檢測：將步驟(2)中的紫外輻照損傷表皮細胞按不同的輻照時間進行培養，培養完成后取出細胞培養皿，檢測表皮細胞紫外輻照損傷指標,測定細胞的相對存活率。

2.根據權利要求1所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，所述表皮細胞為人永生化表皮角質細胞，即HaCaT細胞。

3.根據權利要求2所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，HaCaT細胞的培養過程為：取凍存的HaCaT細胞，放置于37℃水浴鍋解凍，隨后轉移至裝有完全培養基的離心管中，離心、沉淀重懸后轉移至細胞培養皿中，置于37℃，5％CO₂的二氧化碳培養箱培養。

4.根據權利要求3所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，所述完全培養基的成分為含10％胎牛血清的DMEM完全培養基。

5.根據權利要求1所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)所述紫外輻照損傷HaCaT細胞的過程為：取對數生長期的HaCaT細胞進行消化、離心、計數，將細胞調整濃度為1×10⁵個/mL，取100μL/孔接種于96孔板，二氧化碳培養箱培養24h后，吸去培養液，每孔加入預熱的PBS緩沖液50μL覆蓋細胞，150mJ/cm²紫外輻照細胞。

6.根據權利要求5所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法，其特征在于，使用血球計數板計數。

7.一種皮膚紫外損傷細胞模型，其特征在于，由權利要求1-6任一項所述的皮膚紫外損傷細胞模型的建立方法建立得到。

8.權利要求7所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型在鑒定皮膚紫外損傷修復效果中的應用。

9.根據權利要求8所述的一種皮膚紫外損傷細胞模型在鑒定皮膚紫外損傷修復效果中的應用，其特征在于，所述應用為在篩選修復紫外線損傷藥物、化妝品原料中的應用。